145902. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baktériumoknak szuszpenziókból való kicsapására
0 Megjelent: 1959. december 31. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 145.902. SZÁM 12% p. .11-17. OSZTÁLY •— Cl—261. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY Eljárás baktériumok szuszpenziókból való kicsapására CHINOIN Gyógyszer- és Vegyészeti Termékek Gyára, Budapest Feltaláló: dr. Simon Ágoston. Ä bejelentés napja: 1958. január 31. Bizonyos vegyületeknek megvan az a sajátságuk, bogy erjesztéses úton való (bioszintézisük alkalmával nem mennek át a tápoldatba, 'hanem túlnyomó részben az őket termelő mikroorganizmusokhoz vannak kötve. Ez a tény többeket arra készítetett, hogy ezeket a zanyagokat úgy koncentrálják, hogy a mikroorganizmusokat a folyadékfázistól elválasztják mechanikus úton: szűréssel, centrifugálással stb. Ez a gombákkal, sugárgombákkal, egyes algákkal való erjesztés esetén nem okoz nagyobb problémát, nehezebb azonban a kérdés megoldása technológiai szempontból baktériumokkal való erjesztés esetén. A baktériumokat ugyanis kis méretüknél fogva nagyon bajos és hosszadalmas akár üllepíteni, akár szűrni, akár centrifugálni. Amennyiben ez gyakorlatilag egyáltalában lehetséges, különleges berendezésre van szükség. Ezen a nehézségen egyes szerzők, ill. feltalálók úgy kívántaik segíteni, hogy az elerjesztett léhez csapadékképző anyagokat; adtak hozzá (A^/SOJs, FeS04). Ez a módszer azonban tapasztalatunk szerint nem ad kielégítő eredíményt, mert egyrészt igen voluminózus csapadékát ad, vagyis a töményítés kérdése csak részlegesen oldódik meg, másrészt a keletkező icsapadék csak részben ragadja magával' a baktériumokat, tehát a mó.dszer nagy veszteséggel jár. Különböző táptalajakon tenyésztett baktériumokkal — gram pozitív és gram negatív baktériumok (pl. coccusok, Ibacillusok, propionbacteriumok stb.) — végzett munkáink során azt tapasztaltuk, hogy a legtöbb baktérium-szuszpenzió a táptalaj erős meglúgosítása esetén agglutinálódik és pelyhes csapadék alakjában kiválik. Azt találtuk, hogy agglutínáció ilyen körülmények között nem minden baktérium-tenyészetben folyik le egyformán 'tökéletesen. Azonos pH-beállítás mellett egyes baktérium kvantitatíve kicsapódnak, más baktérium-tenyészeteknél a kicsapódás nem teljes ugyan, de nagyjából azért az oldat feltisztulásához vezet. Meglepő módon azt találtuk, hogy ez az agglutináció az alkalmazott táptalaj minőségétől majdnem teljesen független. így pl. E. Coli közönséges bouiJlon-tanyészetében éppen úgy folyik le, mint egy kukoricalekváros-glukozos táptalajon. Megjegyzendő, hogy a steril bouillon lúg hozzáadására nem zavarosodik meg, míg az utóbb említett táptalajban enyhe zavarosodás keletkezik, ama az oldatban levő karbonátok és foszfátok kiválásának tudható be. Propionbacteriumos erjesztéseknél azt találtuk, hogy a Propionibacterium Shemnanii és P. technicum szuszpenziók igen tökéletesein agglutinálódnak már pH 11. alatti értékeknél is. Ha a fermentációs levet naegl'úgosítjuk, túrós csapadék keletkezik, mely lényegében véve az összecsapzódott foaktérium-tömegbőll áll. Ez a csapadék gyorsan ülepszik -és közönséges centrifugán igen könnyen ülepíthető, mikoris a kinyert csapadék nem tesz ki többet az eredeti lé térfogatának 3—4%-ánál. Eljárásunk igen előnyösen alkalmazható B-vitamin koncentrálására. Köztudomású, hogy a kobálaminok erősen lúgos közegben gyorsan bomlanak. Meglepő módon azt találtuk, hogy a fentemlített kísérletnél alig volt B12 --aktivitás-veszteség. Ez nyilvánvalóan annak tudható be, hogy a nátronlúg csak bizonyos idő múlva képes behatolni a baktériumsejtek belsejébe és csak ezután az idő után képes a káros hatását is kifejteni a kobalaminokra. Ha pedig elég gyorsan dolgozunk, a lúgozást és a centrifugálást néhány perc alatt el lehet végezni. A Mg további káros behatása ellen úgy védhető meg a csapadék, hogy gyenge sawiaJ, pl. ecetsavval gyengén megsavanyítjuk. Megsavamyításkor a csapadék feloldódik és ismét stíabil baktérium-szuszpenzió keletkezik. Az így nyert szuszpenzió nemcsak töményebb kobalaiminokra nézve, mint a kiindulási anyag, hanem lényegesen tisztább is, mivel megszabadítottuk mindazoktól a szennyeződésektől, melyeket a táptalaj oldott állapotban tartalmazott. Az így nyert tömény baktérium-szuszpenzió bármelyik szokásos, ismert módon tovább dolgozható és kristályos Bij-vitamin nyerhető ki belőle.
