145315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szpiramicin előállítására szintétikus táptalajon
4 145.315 Az alábbi eredményeket kaptuk: A tápközegben jelenlevő mono- , . kálium- kalciumfoszfát karbonát g/liter g'llter Maximális aktivitás fi g/ml i. Áz e; nek jyes szpir a lánya % II. imici-ban kIII. 2 5 615 13 57 30 2 7 595 36 39 25 2 9 565 49 23 28 3 7 605 25 54 21 3 9 610 39 36 25 4 7 620 28 58 14 4 9 650 34 47 19 4 11 685 46 36 18 sebességű légárammal levegőztetve 25 C° hőmérsékleten tartottuk. A micélium ebiben a táptalajban kitűnően és gyorsan fejlődött. A közeg pH-értéke a művelet kezdetétől fokozatosan csökkent, és 48 óra alatt 5,4-et ért el. Azután ismét 6-ig emelkedett és 115> óra hosszat 6,0 és 6,2 között egy szinten maradt,, ezután pedig fokozatosan tovább emelkedett, 150; óra alatt elérve a 7,0 értéket. Az első 40 óra alatt a keményítőfogyasztás igen. gyors volt, azután azonban rendkívül lassúvá vált. A fermentációs lé végső aktivitása 795 /tg/ml, a háromféle szpiramicin súlyaránya a termékben a következő volt: I 57° /o. II 25%, III 18% 3. példa 170 literes fermentorba az alábbi anyagokat töltöttük: , Kukoricalekvár (50%-os száraz kivonat) 4,8 kg Glükóz 2,4 kg Nátriumklorid 0,6 kg Magnéziumszulfát 0,12 kg Vízvezetéki víz 100 litei A közeg pH-értekét nátriumhidroxiddal 6,8-ra állítottuk be, majd még az alábbi anyagokat adtuk a tápközeghez: Kalciumkarbonát Szójaolaj 0,6 kg 0,48 liter A tápközeget 45 percig sterilizáltuk 120 C° hőmérsékleten. Miután a sterilizált tápközeg már lehűlt 26 C°-ra, beoltottuk a Streptomyces ambofaeiens N. R. R. L. 2420 Erlenmeyer-lombikban nevelt rázott kultúrájának 250 ml-jével. Ezt a kultúrát 25 óra hosszat levegőztettük és kavartuk; ily módon kaptuk az „inokulum-kultúrát". A termelő-kultúrát a következő táptalajjal töltött 800 literes fermentorban szaporítottuk el: Keményítő Ammóniumklorid Nátriumklorid Monokáliumfoszfát Magnéziumszulfát Cinfcszulfát ZnS04 -7H 2 0 Kobaltklorid CoCl2 -6H 2 0 Vízvezetéki víz 16 kg 2 kg 8 kg 1,6 kg 0,4 kg 2 g 0,12 g 370 liter A közeg pH-értékét 850 ml 36 Bé°-os nátronlúg hozzáadása útján 6,7-re állítottuk be, majd még hozzáadtunk következő anyagokat: Kalciumkarbonát (lecsapott) Szójaolaj 2 kg 1,6 liter A tápközeget gőzbevezetés útján 40 percig sterilizáltuk 120 C° hőmérsékleten. Lehűlés után a tápközeg térfogata 400 liter, pH-értéke pedig 7. Ezután a tápoldatot beoltottuk 40 liter „inokulum-kultúrával", majd percenként 205 fordulatszámú lapátos szerkezettel kavarva és 15 ms /óra 4. példa Két 800 literes fermentort megtöltöttünk a 3. példa szerinti módon, csupán a hozzáadott monokáliumfoszfát és kalciumkarbonát mennyiségét változtattuk meg az alábbi táblázatban feltüntetett módon. A kapott eredményeket a táblázat mutatja: Fermentor A B Monokáliumfoszfát Kalciumkarbonát Maximális aktivitás /ig/ml s0,8 kg 0,8 kg A háromféle szpiramicin aránya 2,8 kg 3,6 k 'S 1,015 880 I 50 61 II 31 17 III 19 22. í>. példa Három 800 literes fermentort megtöltöttünk a 3. példa szerinti módon, az ammóniumklorid mennyiségét * azonban az alábbi táblázat szerint módosítottuk. A táblázatban foglaltuk össze a kapott eredményeket is. . Fermentor A B C Ammóniumklorid 1,8 kg 2,0 kg 2,2 kg Maximális aktivitás /xg/ml 68C 850 625 A szpiramicinek I 28 22 37 aránya a II 50 52 33 termékben III 22 26 30 6. példa 800 literes fermentort megtöltöttünk a 3. példa szerinti módon, a 2 kg ammóniumiklorid helyett azonban 2,4 kg ammóniurnszulfátot adtunk a tápközeghez. Ilyen körülmények között a fermentációs lé végső aktivitása 940 //.g/ml, a háromféle szpiramicin mennyiségi aránya pedig a következő volt: I 71%, II 17%, III 12%.
