145314. lajstromszámú szabadalom • Eljárás insulin tisztítására
145.314 3 az alkoholt lepároljuk. A vizes kivonatot, amelynek térfogata 1 liter, pH-ja 3—3,5, szobahőmérsékleten 30 cm magas, 2 om 0-jű, 200 g töltetű Decalso (szintetikus' natriumzeolit) oszlopon engedjük át, amelyet előzetesen híg sósavval H+ ciklusban aktiváltunk. Az insulin oldat átfolyási sebessége 5 om3 percenként. Az áthaladás befejeztével az oszlopot előbb 200 om3 M/500 sósavval, majd 300 om3 deszt. vízzel mossuk. Kimosás után a hormont az oszlopról 200 cm3 85 térfogat % os ammonias etilalkohollal oldjuk le. Az eluáló oldat pH-ja 8,5 átfolyási sebessége 1 cm3 percenként. Leszorítását az oszlopról 80 térfogat %-os vizes etilalkohollal végezzük. Az eluátumból az alkoholt és az ammóniát vákuumban lepároljuk, végül az insulint vizes oldatából közvetlenül kristályosítjuk. 5. Példa 4 kg friss, vegyes eredetű hasnyálmirigyből savanyú alkohollal kapott extrakturniból az alkoholt lepároljuk s a savanyú vizes kivonathoz, melynek térfogata 2 liter, 60 g kaolint adunk. 3 órai keverés után az adszorbenst elkülönítjük s előbb híg sósavval, majd deszt. vízzel mossuk. Kimosása után a tiszta insulin leoldását az 1. példában megadott körülmények között végezzük 600 om3 oldókzer felhasználásával. A szerves oldószer és az ammonia eltávolítása után 100 oms össztérfogatban kristályosítunk. 6. Példa Az 5. példában részletesen ismertetett adszorpciós művelet befejezése után a megkötött hormon leoldását 4% piridint tartalmazó deszt. víz 600 cma -ével végezzük két részletben, szobahőmérsékleten, pH 8,0-on. Az adszorbens elkülönítése után az egyesített eluátumhoz cseppenként annyi 1 mólos sósavat adunk, hogy az oldat pH-ja 5,2— 5,4 közé essék. Az ekkor kicsapódó insulint centrifugálással kiülepítjük, M/100 sósavban oldjuk és 100 cm3 össztérfogatban kristályosítjuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás vizes, vagy vízzel elegyedő oldószertartalmú vizes insulin kivonat tisztítására egyszerű adszorpciós módszerrel, melyre jellemző, hogy a vizes insuliin kivonatból a vércukorszintet csökkentő hormont szilikát típusú adszorbensen gyengén savanyú közegben megkötjük, majd az adszorbensről lúgos kémhatású vizes oldattal eluáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy vizes, vagy alkohol- . tartalmú vizes insulin kivonatot használunk, melynek alkoholtartalmát az adszorbenssel való kezelés előtt 30 térfogat %-nál kisebb, előnyösen mintegy 20 térfogat %-ra csökkentjük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy az insulin kivonatot pH 1,5, előnyösen pH 3,0—3,5 érték mellett hozzuk össze a szilikát típusú adszorbenssel, majd arról pH 7,5—8,5 értékek közt eluáljuk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási miódja, melyre jellemző, hogy a szilikát típusú adszorbensként savval előkezelt szilikátot, előnyösen betonit féleségeket alkalmazunk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jelleimző, hogy a szilikát típusú adszorbensen megkötött insulin eluálása előtt az adszorbensre került szennyezéseket vízzel, vagy vízzel elegyedő szerves oldószerrel leoldjuk. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási .módja, melyre jellemző, hogy az insulin eluálását az adszorbensről szerves oldószert tartalmazó vizes oldattal végezzük, 5—25 C° hőmérsékleten, célszerűen 10—15 C° között. 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy az insulin eluálására 20—85 térfogat %-os etilalkoholt használunk. 8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy az insulin eluálására használt, vízzel elegyedő oldószert tartalmazó lúgos vizes oldatból, semlegesítés után a szerves oldószert eltávolítjuk és a visszamaradt vizes oldatból az insulint kristályosítjuk. A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 2415. Terv Nyomda, 1959. — Felelős vezető: Gajda László
