145287. lajstromszámú szabadalom • Eljárás plazma-, illetve szérumfehérjék frakcionálására és tisztítására
2 145.287 ezen a hőmérsékleten lecentrifugáljuk. (Csapadék Fr. I.) A felülúszó folyadék pH-ját 7,2-re állítjuk, 2n NaOH hozzácsepegtetésével, majd az alkohol koncentrációt felemeljük 19—21%-ra (literenként 130 ml 96%-os ethanol), miközben a hőmérsékletet —3 C°-ról —5 C°-ra csökkentjük. Egy éjjelen át —5 C°-on ülepítjük, a felülúszó nagyrészét leszívjuk, a csapadékot centrifugáljuk (csapadék Fr. II—III; felülúszó supernatans I). A Fr. II—III csapadékot suspendáljuk és keverés mellett 45 percet extraháljuk, ecetsavval pH 5,1—5,2-re beállított 10 liter 0,4—0,6% NaCl-ot tartalmazó 15 százalékos alkohollal —2, —3 C°-on. A csapadék lecentrifugálása után a felülúszó folyadék pH-ját 0,2M-s dinátriumhidrofoszfáttal pH 6,8—7,2-re állítjuk és az alkohol koncentrációt 96%-os alkohollal —3 C°-ról —5 C°-ra való hűtés közben 20— 22%-ra emeljük. Egy éjjeli állás után centrifugáljuk és a kapott csapadékot kb. egyenlő térfogatú ionmentes vízben —2, —3 C°-on suspendálva, majd lefagyasztva beszárítjuk. A kapott termék a kiindulási anyag fehérjetartalmának 9—11%-a, tisztasága 95—100%-os gamma-globulin. A supernatans I. pH-ját ecetsavval 4,8-ra állítjuk, —5 C°-on, a kiváló csapadékot egy éjjelen történő állás után lecentrifugáljuk, majd a kb. 20% szárazanyag tartalmú centrifugált csapadékot 1000 g-ként 1280 ml 5%-os —2 C°-ra hűtött alkoholban suspendálva —2, —4 C° hőmérsékleten extraháljuk, majd lecentrifugáljuk és a felülúszó részt fél térfogatának megfelelő mennyiségű —2 C°-ra hűtött 5%-os ethanollal lefagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott termék a kiindulási fehérje mennyiség 40—45%-a, 85—90%-os albumin. 2. példa 10 liter citrát plazma vagy szérum pH-ját 2n ecetsavval 5,6—5,8-ra állítjuk, lehűtjük 0—1 C°-ra és hűtés közben hozzácsepegtetünk 96%-os ethanolt, 9%-os alkohol koncentrációig (103,4 ml/liter), hőmérséklet a kicsapás végén —3 C°. Ezután a fenti példában említett módon lecentrifugáljuk. (Csapadék Fr. I.) A felülúszó pH-ját 2n NaOH hűtés közbeni hozzáadásával pH 7,2-rc^ állítjuk, majd. az alkohol koncentrációt 19—20%-ra emeljük 96%-os alkohollal (130 ml/l), miközben a hőmérsékletet —3 Cc -ról —5 C°-ra csökkentjük. Egy éjjelen át —5 C°-on ülepítjük, másnap a felülúszó tisztáját leszívatva, a csapadékos részt lecentrifugáljuk (felülúszó supernatans I; csapadék Fr. II—III), a Fr. II—III csapadékot 10 liter 0,4— 0,6% NaCl-ot tartalmazó 15%-os —2, —3 C°-ú alkoholban suspendálva, pH-ját ecetsavval 5,1— 5,2-re állítjuk, majd 45 percig keverve extraháljuk. Ezután centrifugálva a felülúszó pH-ját 0,2 M-s dinátriumfoszfáttal pH 6,8—7,2-re állítjuk, majd az alkohol koncentrációt 96%-os alkohollal 20—22%-ra emeljük, —3 C°-ról —5, —6 C°-ra hűtve az anyagot. Egy éjjeli állás után centrifugáljuk és a kapott csapadékot kb. egyenlő térfogatú ionmentes vízzel —2, —3 C°-on suspendálva lefagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott termék a ' kiindulási anyag fehérjetartalmának 9—11%-a, tisztasága 95—100%-os gamma-globulin. A supernatans I,-t —5 C°-ra lehűtött, egyenlő térfogatú 20%-os alkohollal hígítjuk, majd pH-ját ecetsavval 4,8-ra állítjuk. —5 C°-on való egy éjjeli állás után lecentrifugáljuk és a kb. 20% szárazanyag tartalmú csapadékot 1000 g-ként 1280 ml 5%-os —2 C°-ra lehűtött alkoholban suspendálva —2, —4 C-on 1 órán át keverve extraháljuk, majd centrifugáljuk és a felülúszó részt fél térfogatának megfelelő —2 C°-ra hűtött 5%-os etanollal lefagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott termék a kiindulási fehérjemennyiség 40—45%-a, 85—90%os albumin. A kicsapó alkohol hőmérséklete mindenegyes esetben —15 C° volt. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás plazma-, illetve szérumfehérjék frakcionálására, illetve tisztítására alkohollal, azzal jellemezve, hogy a fibrinogénfrakciót pH 5,6—5,8-nál csapjuk ki és a szokásos módon kapott gammaglobulin frakcióból a" plazma térfogatával azonos térfogatú 0,04—0,06% NaCl-t tartalmazó 15%-os etanollal pH 5,1—5,2 és —2, —3 C° hőmérséklet mellett a gamma-globulint kioldjuk. 2. Eljárás albumin kinyerésére azzal jellemezve, hogy a gamma-globulin kicsapása után nyert felülúszó folyadékból az albumint 20—25% etanollal csapjuk ki és a csapadékból 100 g-ként 128 ml 5%-os etanollal kioldjuk az albumint. A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 2412. Terv Nyomda, 1959. - Felelős vezető: Gajda Lász'ő
