144230. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy tisztaságú, biológiailag standardizált hormonkivonat előállítására sertés és szarvasmarhe mellékveséből

Megjelent: 1958. szeptember 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 144.230. SZÁM 30. h. 1—8,-OSZTÁLY —-GO—521. ALAPSZÁM Eljárás nagy tisztaságú, biológiailag standardizált hormonkivonat előállítására sertés és szarvasmarha mellékveséből A Magyar Állam, mint a Gyógyszeripari Kutató Intézet (Budapest) jogutódja Feltalálók: dr. Hegyeli Endre, dr. Rados Márta, dr. Fekete György Bejelentés napja: 1956. május 16. Mellékvese kivonatok előállítására sokféle eljárás ismeretes. Ezek közül azonban az újabb vizsgálatok szerint, melyek az egyes szteránvázas anyagok tiszta előállításához vezettek, a legmegfelelőbb kivonási eljárás a Pfiffner-Swingle (Am. J. Physiol. 96. 153. 1931.) féle alkoholos ill. a Grollmann (J. Biol. Chem. 100. 429. 1933) és Cartland-Kuizenga (J. Biol. Chem. 116. 57. 1936) féle acetonos módszer. Wettstein és munkatársai (Helv. Chim. Acta. 37. IV. 1954. 1163) aldoszteron izolálására a Kuizenga módszert találták legmegfelelőbbnek. Az említett kivonási eljárások azonban teljes szarvasmarha mellékveséből, vagy marha mellékvesekéregből indulnak ki. Kísérleteink szerint egyik eljárás sem alkalmas a magas zsírtartalmú sertés mellékvesék feldolgozására, jóllehet ezekben a szervekben úgy saját kísérleti adataink mint irodalmi adatok (Wettstein: Exneríentia. X/10. p. 397. 1954) szerint magasabb a hormontartalpm, mint marha mellékvesében. A sertés és szarvasmarha mellékveséből kísérleteink szerint a legmagasabb kitermelést a friss, elaprított szervek acetonos kivonásával érhetjük el. A szervek előzetes szénsavjeges kifagyasztása a kitermelést nem javítja. Az acetonos kivonat anyag bepárlása után azonban sertés mellékvesénél a vizes kivonat mellett nagy mennyiségű lipoid válik ki. Marha mellékvese esetében a kivált lipoidok mennyisége kevesebb. Ha ezt a zsíros-vizes oldatot Kuizenga módszer • szerint petroléterrel kirázzuk, erős emulzió keletkezik. Ez részben lehetelenné teszi a vizes kivonat zsírmentesítését, másrészt az aktív anyagot olyan mértékben köti meg, hogy azt az emulzióból még igen nagy mennyiségű organikus oldószerrel is csak nagy veszteségekkel lehet izolálni. Rapirkroraatográfiás vizsgálatokkal megállapítottuk, hogy az acetonos kivonat anyag bepárlásánál, a bepárlástól függő mértékben az aktív anyagnak többnkevesebb része a lipoid fázisba jut. Találmányunk lényege, hogy a liopid-szenynyezésbe jutott aktív anyagot is kinyerjük, emulzió képződése nélkül. Az acetonos oldatot eredeti térfogatának 1/20— 1/30-részére pároljuk be. Ilyenkor a lipoid anyag a vizes fázistól jól elkülönül és attól egyszerű szűréssel elválasztható. A vizes oldat sárga színű, tiszta folyadék (A), A lipoidokat tartalmazó anyagot ezután 70%-os alkohol és petroléter között megoszlatjuk és az alkoholos kivonatot be pároljuk.. A kapott alacsony zsírtartalmú,'hormontartalmú vizes oldatot (B) az (A) oldattal egyesítjük. A továbbiakban az egyesített oldatokat ismert módon etiléndikloriddal kivonatoljuk. Az oldószer bepárlása után hígan folyó barna olajat kapunk, melynek még magas adrenalin tartalma van. Kísérleteink azt mutatták, hogy ezt az anyagot a leírt több lépéses oldószeres megoszlatással csak nagy veszteségek árán tudjuk tisztítani, de a kapott termék még ekkor is sok lipoidot tartalmaz. Ennek a. terméknek további tisztítására a legmegfelelőbbnek a Pfiffner módszernél leírt permutitos tisztításnak egy általunk módosított formáját találtuk. Megállapítottuk, hogy ha anyagunkat előzetes tisztítás nélkül ahs. alkoholban oldva NH3 ciklusú szintetikus szilikát ioncserélőből készített, oszlopon folyatjuk át,. nemcsak az adrenalintól, hanem a kísérő liopid szennyezések legnagyobb részétől is meg tudunk szabadulni. Az ilyen módon egy lépésben elért tisztasági fokot csak többszörös oldószeres megoszlatás és két egymást követő szilika-géles oszlopkromatográfiával tudtuk elérni. (1. Wettstein: Experientia 9/IX. 1953. 333). A kapott termék etilén ill. propilénglifcolM 0.9%-os konyhasó oldatába vihető és Seitz szűréssel veszteség nélkül sterilizálható ill. tisztítható. A vizes odatból kloroformmal kivont anyag kísérleteink szerint mgként 100—200 gamma Kendall E komponens bi-