143511. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tisztított tífusz-antigének előállítására Salmonella typhosa baktériumból
Megjelent 1957. március hó 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 143.511. SZÁM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — GU—83. A.LAPSZÁM Eljárás tisztított tífusz-antigének előállítására Salmonella typhosa baktériumból A magyar állam, mint a feltalálók: Gunda László vegyész, Dr. Joó István orvos és Dr. Richter Péter vegyész budapesti lakosok jogutóda. A bejelentés napja: 1953. szeptember 24. A gyakorlatban használt tífusz-oltóanyagok általában erős helyi és általános reakciókat (láz, fájdalom stb.) okoznak. A találmány szerinti eljárás célja olyan tífusz-antigén előállítása, amely az oltóanyag hatásosságának megtartása mellett az említett kellemetlen melléktüneteket nem idézi elő. A, találmány szerinti eljárás alapját az a felismerés képezi, hogy az antigén molekulájában az immunizáló poliszacharidrészhez kapcsolódó és az antigén toxicitását okozó aminoesoportokat vagy más hasonló nitrogéntartalmú csoportokat tartalmazó molekularészek sósavas közegben alkálinitritíél való kezelés útján kevésbé toxikussá tehető anélkül, hogy ezzel az antigénmolekula immunizáló hatása csökkenne. A salétromsavas kezelés hatására ugyanis az aminócsoportok hidroxillá vagy diazónium-csoporttá alakulnak át, utóbbiak az alkálinitrit és sósav hozzáadása után történő melegítés hatására elbomlanak és így nem toxikus, de immunizáló hatású termékek keletkeznek. A találmány szerinti eljárás tehát abban áll, hogy a Salmonellatyphosa pl. 1% peptonos élesztős és 2%-os agár tenyészetéről lemosott baktériumokat centrifugálás után aeetonos, majd éteres mosással szárítjuk. A száraz és elölt baktériumport desztillált vízben szuszpendáljuk és 8,5 pH-értéken tripszinnel emésztjük. Az emésztett anyagot alkohollal kicsapjuk, centrifugáljuk, acetonnal és éterrel szárítjuk, majd. az így kapott nyers antigént — amely egyébként az önmagában ismert előkészítő műveletek és tripszines emésztési eljárás egyéb változatai útján is előállítható — vetjük alá a fentebb ismertetett alkálinitrites és sósavas kezelésnek. Az alkálinitrites-sósavas kezelés és melegítés után kapott oldatból alkoholos kicsapás útján nyerhető ki a csaknem tiszta ,.0" antigén, míg az oldat bepárlása útján kapjuk meg a „Vi" antigént. Mindkét anyag továbbfeldolgozása, célszerűen acetones és éteres mosás, szárítás és fiziológiás konyhasóoldatban való oldás útján történhet. E műveletek közül ugyancsak ismeretlen volt eddig és így önmagában is a találmány egy részét képezi az „O" és a „Vi" antigén alkoholos frakcionálással történő szétválasztása. E müvelet a talál-i many érteiméiben oly módon hajtható végre, hogy a mindkét antigént együtt tartalmazó termék desztillált vizes oldatához annyi etilalkoholt adunk, hogy az alkoholkoncentráció kb. 70%-os legyen. Ekkor a „O" antigén csaknem tiszta állapotban kiválik, míg a „Vi" antigén oldatban marad és onnan bepárolás útján kinyerhető. A találmány szerinti eljárás kivitelét a következő példa szemlélteti: A Salmonella typhosa tenyészetről lemosott baktériumokat 25-35 milliárd/ml csíratartalomra hígítjuk 1 térfogat mosadékhoz 2 térfogat acetont öntünk, összerázás után 8 órát állni hagyjuk. Centrifugálás után V2 térfogat acetonnal szétdörzsöljük, centrifugáljuk az üledéket. 1/ 2 térfogat éterrel hasonlóan szárítjuk. Gyorsan száradó baktériumport kapunk. 1 sr. szárított port 150 sr. desztillált vízben szuszpendálunk, pH-ját 8,5-re állítjuk és 0,1 sr. tripszint adunk hozzá és szobahőmérsékleten emésztjük. Vo óra alatt a szuszpenzió feloldódik és opaleszkáló oldatot kapunk. Ujabb 0,04 sr. tripszin hozzáadása után pH 8,5-ön további 10 percig emésztjük Centrifugálás után a felülúszó folyadékhoz 2,8 térfogat 98%-os alkoholt adunk, és a pH-t 3,0-ra állítjuk. A keletkezett csapadékot centrifugáljuk és acetonnal és éterrel a fenti módon szárítjuk. Kb. 0,35—0,40 sr. csapadékot kapunk. (I) Vízben opaleszkáló oldatot ad. 1 sr. I anyagot 150 sr. desztillált vízben oldunk, 2,5 sr. 20%-os nátriumnitrit oldatot és utána 1,54 sr. 37%-os sósavat adunk hozzá rázás közben. A folyadékot 45 percig 60—70 C°-os vízfürdőn melegítjük. Lehűlés után a sárga folyadékot lecentriíugáljuk a kevés sárga csapadékot eldobjuk. A felülúszó folyadék pH-ját 4,8-ra állítjuk és 2,8 térfogat 98%-os alkoholt adunk hozzá. A kapott csapadékot centrifugálás után a fenti módon szárítjuk acetonnal és éterrel, A kissé sárgás csapadék (IT) vízben jól oldódik. Súlya a felhasznált I. 40—50%,-a. A II. csapadék felülúszó folyadékát 60 C°-on bepároljuk. A kapott erősen sárga és higroszkopos maradékot 2x200 sr. száraz acetonnal kivonjuk.
