143318. lajstromszámú szabadalom • Eljárás adrenokor tikotrop hormon előállítására

Megjelent 1956. október hó 1-én ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 143.318. SZÁM 30. h. 1-8. OSZTÁLY — Go-406. ALAPSZÁM _ ^ Eljárás adreitokoriikotrop hormon előállítására A magyar állam, mint a Gyógyszeripari Kutató Intézet (Budapest) jogutódja. Feltalálók: dr. Hegyeli Endre, Kovácsné Szabó Ilona és dr. Molnár István. Bejelentés napja: 1954. december 22. Az adrenokortikotrop hormont rendszerint sertések hipofízisének mellsőlebenyéből állítják elő, mert ezek a mirigyek e hormonban a leggazdagabbak. Ismeretes eljárás értelmében a hipofizis mellsőlebenyt jégecettel kivonatolják (Payne és. munkatársai, J. biol. Chem. 187. kötet, 719. oldal, 1950) és jó hozamot érnek el. A jégecetes kivonatolás azonban költséges és hátránya, hogy az eljárás során keletkező aceton-jégecet-éter-elegy bői az egyes alkatrészeket csak körülményesen lehet regenerálni. A jégecetes eljárással készített hormonkészítmények intramuszkuláris inj ekei ós alkalmazás esetén kevésbbé hatásosak, mint pl. acetonos kivonatolással kapott készítmények. Az ugyancsak ismeretes acetonos kivonatolásnál (i. Choh Hao Li és társai, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 78. kötet 665. old. és 681.389 sz, angol szabad.) a hozam lényegesen kisebb, mint a jégecetes eljárásnál, úgyhogy ez az eljárás nem kielégítően gazdaságos. A találmány olyan eljárás, melynél a fentemlített hátrányokat kiküszöböltük és jó hozammal, gazdaságos módon hatásos hormonkészítményt tudunk előállítani. A találmány alapját az a felismerés képezi, hogy a hozamot lényegesen növelni tudjuk, ha a kivonat acetonkoncentrációját 96 térf. %-nál magasabbra emeljük mint az irodalmi adatok szerint alkalmazott maximális 95%-os acetonkoncentráció. Az acetonkontcentráció fontossága alábbi kísérleti adatainkból tűnik ki: A/, aceton végső 1 kg friss hipofízisből koncentr. termelt hormon mennyisége: 93.5 % 18.000 94.5 % 26.000 95.95% 30.000 96.9 % 38.000 97.25% 40.000 (Megjegyzés: a fenti hormoinmennyiségek thymus-atrophias egységekben — lásd dr. Fekete, dr. Gyermek. Acta Pharm. Hung. 1955. II. füzet, 74. oldal — vannak megadva, a nemzetközi standardhoz — az Armour-gyár „La 1 a" jelzésű készítményéhez — viszonyítva.) E felismerésnek megfelelően az acetonnal vízmentesített és megszárított sertés hipofizis mellsőlebenyből savanyú víztartalmú acetonnal kapott kivonatot a találmány értelmében annyi nagytöiménységű acetonnal elegyítjük, hogy a kapott oldat acetonkoncentráciőja legalább 96 térfogatszázalékos legyen, majd a kicsapódott hormont elkülönítjük és szárítjuk. A találmány értelmében továbbá a vízmentesített hipofizis lebenyt akként állítjuk elő, hogy a hipofizis mellsőlebenyt friss állapotban felaprítjuk és azonnal acetonba helyezzük, hat órán. belül a felhígult acetontól elkülönítjük és tömény aceton hozzáadása után nedvesen finomra őrölve vízmentesítjük, az acetontól elválasztjuk, majd megszárítjuk. Az így kapott száraz készítményt dolgozzuk azután fel ACTH-ra. A találmány szerinti eljárással kapott nyers hormon mg-ként 2 — 0.2 egység ACTH-t tartalmaz, míg az irodalomban említett acetonos eljárással maximálisan 1.2--0.2 egys./mg értékű hormon nyerhető. Az irodalomban ismertetett módon 1 kg. hipofíziséből az acetonos eljárással legfeljebb 20—25.000 E ACTH állítható elő. A találmány értelmében továbbá aránylag csekély —15—20%-os — ACTH veszteség árán hátsólebenyhormonban szegény készítményt nyerhetünk, ha úgy járunk el, hogy az ACTH acetonos kivonása előtt a szervport 1—4 órán át lOOVnál magasabb hőmérsékletre hevítjük, a lehütött port kissé savanyú v. közömbös pH-jú vízzel kivonatoljuk, a hátsólebeny-hormonok eltávolítása céljából, majd az így kezelt nedves hormonport kivonatoljuk a fent leírt módon savanyú acetonnal. Ily módon a hátsólebeny-hormonok 50—70%-át távolítjuk el és az ilyen előkezelt szervporból előállított ACTH készítmények hátsólebeny-hormon tartalma már nem számottevő (0.05—O.06 E vazopresszin 1 egységnyi ACTH hormonban). Példa: 1. 1 kg frissen gyűjtött sertéshipofizis elsőlebenymirigyet kézi húsdarálón még a vágóhídon megőlölünk és az őrleményt száraz (98%)-os) acetonban fogjuk fel. Az acetonos masszát beszállítjuk