142779. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szpiramicin előállítására

142.779 Streptomyces griseolus S. 3486 Mikroszkopikus morfológia Szintetikus agar Glukózos húsleves Zselatin Burgonya Tej Nitrátok Színezőanyag Csavarvonalszerű képződményeket nem figyeltek meg; a spórák alakja oválistól gömbig túlsúlyban van a szürke légmicélium; oldható színezőanyag hiányzik gyenge barna színeződés vagy semmi folyósodva; sárgás hártya színeződés krémtől feketéig; a burgonya barna színt vesz fel koagulált, peptonizált nitritekké redukálva gyenge barna színképződése Csavarvonalszerű képződmények jelen vannak; a spórák alakja oválistól gömbig túlsúlyban van a szürke légmicélium; az oldható nagyon gyenge színezőanyag barnássárga borostyánságra színeződés, vagy semmi folyósodva; gyenge barnássárga színeződés világos barnától sötét barnáig; a burgonya barnára színeződik 26 C°-on: peptonizálva, észlelhető koagulálás nélkül nitritekké redukálva színeződés sárgástól gyenge barnásig A találmány szerinti eljárás egyik kiviteli módját a szpiramicin előállítására az alábbiakban ismertetjük. Vizes tápközeget az S.3486 torzs tenyészetével beoltunk és aerob fermentálás után a keletkezett szpiramicint ä tenyészközegtől elkülönítjük, a tenyészközeg emellett egy másik antibiotikumot is tartalmaz, mely az irodalomban már ismeretes (Cosar, Ninet, Pinnert, Preud'homme, C.R. 234, 1948, 1952) és amelynek *a kongocidin nevet adták (Daspois és Ninet, 6. nemzetközi mikrobiológiai kongresszus, Rassunti delle communicazioni, I. köt. 162. old., 1953); ennek az antibiotikumnak nincsenek olyan értékes tulajdonságai, mint a szpiramicinnek és az kristályosan elkülöníthető. E két antibiotikum elkülönítése könynyen elvégezhető, amint ezt a következőkben ismertetjük. Az S.3486 tenyészetet a felszínen fermentálhatjuk, de általában előnyben részesítjük, ha bemerített (szubmergált) tenyészetet erjesztünk. Az erjesztést különösen a következő vázlat szerint vezethetjük. Tenyészet agáron Tenyészet Erlenmeyer-féle lombikokban, rázva Beoltás erjesztő készülékekben Szaporítótenyészet erjesztő készülékekben A tápközegben — hasonlóan az egyéb közegekhez, amelyekben antibiotikumok előállítására másfajta gombákat tenyésztenek — az alábbi anyagok találhatók: asszimilálható szénforrás, aszimilálható szerves vagy ásványi nitrogénforrás, bizonyos ásványi sók, mint amilyenek a foszfátok, ezenkívül nyomokban különféle fémek, melyek általában szennyeződésekként a közeg egyéb összetevőiben találhatók. Asszimilálható szénforrásként az alábbi anyagok hasznosíthatók: lipoidok (növényi vagy állati olajok), különféle többértékű alkoholok (glicerin) és előnyösen ,asszimilálható szénhidrátok, így közönséges keményítő, oldható keményítő, továbbá cukrok, mint nádcukor, glukóz, maltóz, és dextróz, és vízben oldható vagy részben oldható egyéb szénhidrátok, mint a cukoralkoholok. Alkalmas asszimilálható nitrogénforrásként az anyagok nagy választéka áll rendelkezésünkre; ilyenek: aminosavak, hidrolizált vagy nem hidrolizált kazein, hal-liszt, szójaliszt, húskivonatok, májpogácsa, száraz gabonamoslék, élesztőkivonatok vagy autolizátumok és különféle egyéb növényi vagy állati eredetű nitrogéntartalmú anyagól. Nitrogénforrásként a tápközeghez ugyancsak hozzáadhatunk még olyan vegyi anyagokat, mint amilyenek a karbamid, a nitrátok és az ammoniumsók. Azt találtuk, hogy a kukoricalekvár értékes adalék az erjesztési közeghez, tekintettel arra, hogy sokféle szerves és ásványi anyagot tartalmaz. Előnyösnek bizonyult az is, ha a közeghez lényeges ásványi sókat adunk, mint nátriumsókat (pl. konyhasót), kalciumsókat (pl. szénsavas meszet), és így tovább. A közeg pH-ját sterilizálás előtt lényegileg a semleges körzetbe visszük.,előnyösen 6 és 7 értékek közé. Az erjesztést 24—28 C°-on végezzük, célszerűen 26 C°-on. A szaporítótenyészet fejlődése nem nagyon gyors; mindamellett 3—4 nap után azt befejezettnek tekinthetjük. A fő jellegzetességek a következők: először is a pH érték mintegy 6,4-re csökken, majd kb. 30 óra után 7,5-re néha ennél magasabbra is emelkedik. Űgy látszik mintha ez a pH emelkedés összeesnék a glukóz teljes elhasználásával. A szpiramicintől