142294. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztreptomicin-sók tisztítására
Megjelent 1954. évi március hó 15-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 142.294. SZÁM. 30. h, 1—8. OSZTÁLY. — KO—570. ALAPSZÁM. Eljárás sztreptomicin-sók tisztítására A Magyar Állam, mint a Központi Biokémiai Ipari Kutató Laboratórium, Budapest, jogutóda. Feltaláló: Varga Ferenc kutató, Budapest. A bejelentés napja: 1952. július 15. A streptomyces griseus törzs erjedéséé oldatokban sztreptomicin (sztreptomicin A) nevű antibiotikumot tenmiei A sztreptomicin A mellett azonban változó mennyiségben egy miásiik antibiotikum, a mannoziidto-sztaeptomicin (sztreptomicin B) is "keletkezük. Utóbbit ia sztreptomicin A-tól el kell választani, mert sóikkal fcevésibibé hatásos annál és így a kinyert streptomiicyn A értéikét csökkenti. Ezen elválasztásira eddig az irodallomlbóíl többféle módszer vált ismeretessé. Ilyenek a kromatográfiás elválasztás (U. S. P. 2,540.284, Robiért Peck; Ann. N. Y. Aciad. Sei. h9. 235—48, 1948.: az ellenáramú szakaszos extrakcióval történő szétválasztás (Keeffe-DoHiver-Stllleír, J. Am. ehem. Soc. 71. 2462—-7, 1949.), valamint a GaCl2-lkoimiplex só késaítése, amelynél a sztreptomicin A komplex sóként kikristályosodik, a sztreptomicin B oldatban mairad. Kísérleteink során azt tapasztaltuk, hoigy metanolban a sztreptomicin A klórhidrátjának oldhatósága nagyobb, mint a sztreptomicin B klórhidrátjáé. Ezt & megfigyelésiünket ia két só elválasztására olymódon tudtuk felhasználni, hogy a keverék-antibiotikum klórhidrátjának ímetanotltos oldatához aoetont vagy más, a sztreptomicin sókat nem oldó és metanollal elegyedő oldószert adtunk részletekben. A frakcionált kicsapás során előbb sEtreptomicin B-foen dús anyag váiliik ki, az anyalúgfoól pedig sztreptomicin A-ban gazdagabb anyag. A módszer rendszeres keresztülvitele gyakorlatilag teljes elválasztást is lehetővé tesz, de már egyszeri alkalmazása is jelentős dúsításhoz vezet. Így pl. olyan keverékekből, amelyekben az összetevők aránya olyan, hogy a túlnyomóan jeleimlévő sztreptomicin B a fentamlített niódsaerek közül a legegyszerűbbet, a OaCl2 -kompIiex késaítését meghiúsítja, már egyszeri frakcionált kietsapási művelettel olyan termékhez jutunk, amelynél a komplex són keresztül végzett tisztítás már lehetségessé válik. A módszer különös előnye, hogy miniden anyagiráfordítás nélkül pusztán egy szűrés-többlet munkával kivihető olyan esetekben, melyekben metanol-oldataokból a sztreptoimicint aceton hozzáadásával amúgy is ki kell csapni (pl. U. S. P. 2,<541.420.). 1. példa. Ca012 kettős8Ó anyalúg feldolgozása: az anyalúg térfogata 2090 ml, melyhez 1000 ml afos. etanolt adtunk. Maitól meghatározás szerint, 79 millió egységet tartalmazott, biológiai meghatározás szerint 40.6 millió egységet. E két adatból számítva a sztreptomicin A 38%. Ehhez hozzáöntöttük az acetont, szűrtük, majd a sízűritethiaz ismét aoe tont öntve, ismételtük, stb. A csapadékokat megszárítottuk és megvizsgáltuk. Az, eredményeket az alábbi táblázat foglalja cjssze: Használt aceton Súly S KE^mg BE/mg ossz KE Ossz. BE Str. Ao/ 0 500 5.8 251 99 1,430.0000 571.000 19.5 500 " 37.7 254 100 9,580.000 3,770.000 19.5 1000 74.0 320 . 147 24,420.000 10,800.000 27.0 1000 65.6 , 271 140 17.800.000 9,160.000 33.5 2000 42.8 296 178 12,680.000 7,630.000 43.5 3000 18.3 251 205 4,590.000 3,760.000 71.5 5000 11.4 231 200 2,840.000 2,280.000 79.0
