141438. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fibrinszivacs és nagy tisztaságú kristályos fibrinogén előállítására

Megjelent 195.'. évi .iiiiius hó \r-ju

. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 141438. SZÁM. .30 h. 1—8. OSZTÁLY. OEP-M. ALAPSZÁM. Eljárás flbrinszivacs és nagy tisztaságú kristályos fibrinogen előállítására. A Magyar Állam, mint a feltalálói« Dr. Gerendás Mihály vegyész és Dr. Bagdy Dániel orvos, budapesti lakosok jogutóda. A bejelentét napja: 1949. november 18. A gyógyászatban egyre elterjedtebbem nyer alkalmazást az úgynevezett flbrinszivacs vagy fibrínhab, amely nem egyéb, mint fibrinogénböl nyert, likacsos szerkezetű fibrin. Ez az anyag jói alkalmazható különösen műtéti eljárásoknál, mint vérzéscsillapító szer, mert a vérző területet jól lezárja, a vér megolvadását elősegíti és mint természetes alvadék, a seb gyógyulására is jó hatást gyakorol. A fibrinszivacs előállításához azonban csak nagy tisztaságú fibrinogen használható, mert míg a fibrinogen nem fajspecifikus, addig a szennyezésként jelenlévő fehérjék fajspeciflku-, sak és ezért — ha csak a fibrinogen nem emberi plazmából készült —; allergiást jelenségeket okozhatnak. '..-'..• • ' Azt találtuk, hogy az eddigit messze felülmúló tulajonságú fibrinszivacshoz, vagy habhoz Juthatunk az esetben, ha kristályos fibrinogénböl indulunk ki. Ha a fibrint trombtnnal kristályos fibrinogénböl vagy ebből kapott készítményből, pl. tömény vizes oldatból álMtJuk elő. az fgy nyert szivacs az eddig ismertnél sokkal kompaktabb struktúrát mutat és nemcsak vérzéscsjllapltásra, hanem sebészeti műtéteknél üregek kitöltésére is alkalma». Emellett a nagy tisztaság folytán szennyezések oly csekély mértékbe» fonilhatriak c«ak do, Mfy azok allergiás jelenségeket nem vátauu* kí A fibrinszivBcsot célseerflen úgy állítjuk elő, hogy a kristályos fibrinogént trombinnal, illetve trombtíi oldattal hozzuk össze, a keletkező kocsonyás noásaert megfagyasztjuk és abból a vizet. iBetve jeget alacsony hőmérsékleten, pl. vákuumszubHroálással eltávolítjuk. A fenti eljáráshoz használt kristályos fibrinogen előállítása ugyancsak taláJthányunk tárgya. Á fibrinogen elkülönítésére az eddigi eljárásokban általában három módszert alkalmaznak. Az egyik eljárás alapját semleges sókkal történő frakcionált kicsapás képezi, a másik szerint a fibrinogént adszorpció és azt követó eluálás segítségével különítik el. a harmadik eljárás szerint pedig alacsony hőmérsékleten alkalmazott alkoholos frakcionálási használnak. A fenti eljárásokkal, illetve ezek kombinálásával általában csak 80—S5& tisztaságú fibrinogen oldat állítható elő, amely a, fent kifejtett okoknál fogva fibrinszivacs előállításához nem megfelelő, a fibrinogen további tisztítása pedig tísak időtrabló, bonyolult és költséges műveletekkel hajtható végre. Azt találtuk, hogy a fenti eljárásokkal szemben aránylag egyszerű módon nagy tisztaságú kristályos fibrinogénhez juthatunk, ha a kiindulási vérplazmát először .— pl. valamely ismert eljárás, segítségével — ffbrinogénbeh dúsítjuk, célszerűen 40—55% fmrinogén. tartalomra hozzuk, e dúsított anyagot feloldjuk és az oktatót csökkenő pH irányában frakcionált kicsapásnak vetjük alá. Tapasztalataink szerint a dúsított fibrinogen oldat fokozatos savanyításakor körülbelül 5,8'pH-lg idegen fehérjék csapódnak : ki; viszont 5.8—5,2 pH tartományban, előnyösen 5,6—5,3 pH között nagy 'tisztaságú fibrinogen válik le, amely már csak S—1556 szennyezést tartalmaz: A savanyítást szerves vagy szervetlén savval, előnyösen sósavval foganatosítjuk. A kapott fibrinogen csapadékot átcsapással még tovább tisztítjuk. Evégből a csapadékot pl. kissé lúgos nátriumklorid hozzáadásával vagy egyszerű lúgozással ismét oldatba visszük és az oldatból a fibrinogént a fentemlített pH határok között végrehajtott savanyítással újból kicsaptok. Az eljárás egy rendkívül előnyös foganatosltásl módja szerint az átcsapást akként végezzük, hogy a fibrinogénböl álló csapadékot ammóniával gyengén lúgossá tett közegben feloldjuk, majd az oldatot állani hagyjuk. Az ammónia fokozatos elpúrolgása folyamán az oldat lúgos-sága lassan csökken és ah hói a fibrinogen finom kristályos alakban, nagv tisztaságban válik ki.