140468. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szterinek mikrobiológiai átalakítására
Mpgjelent : 1951 október 15. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 140468 szám. 12 o 25 osztály. P-11641 alapszám. Eljárás szte rínék mikrobiológiai átalakítására. PALIK ÉS TÁRSAI GYÓGYSZER ÉS VEGYÉSZETI GYÁR KFT BUDAPEST. A bejelentés napja : 1948. május 21 Azt találtuk, hogyha egy általunk felfedezett a piridint elbontó b aktér iumtenyészcíben szterineket disz pergálunk, bizonyos idő eltelte után azok átalakulnak és rendszerint oxigénben gazdagabb szterinszármazékok keletkeznek. A folyamat piridin jelenlétében is végbemegy, ami annyit Jelent, hogy a kultúrába bekerülő egyéb bakté riumok ott tovább néni szaporodnak és igy a tenyésztés alatt esetleg föllépő baktérium an tagonizmus kiküszöbölődik, A találmány lényege tehát az, hogy egy általunk felfedezett baktériummal fontos átalakítások végezhetők szterineken, anélkül, hogy a folyamat során a sterilitásról különösebb gondoskodás történnék. Példa: Baktériumtáptalajt készítünk a következő anyagokból: városi vezetékviz 0.1% KgHPO^, 3.4% \igSO4, 0.004% FeSÚ4, 0.2% piridin. Az gy készült táptalajban, miutár azt beoltottuk oiridinbontó baktériummal, elkeverünk literenként 0.5 g finoman elporitott choleszterint. A diszpergálást úgy is elvégezhetjük, aogy a cholesztrint a táptalajho z szükséges piridinben feloldjuk s a még mdeg oldatot a táptalajba öntjük. Ekkor a cholesztrin mik* rokristályok alakjában kicsapódik. A tenyészést 34°-os termosztátban 14 napig folytatjuk, tözben a tenyészeten lassú áramban állandóan levegőt buborékoltatunk keresztül. Az elhasznált piridint 2-3 naponként pótoljuk, ügyeljünk azonban arra, hogy a tenyészet piridintartalma ne legyen több, mint 0.2%. A tenyészidő lejárta után a tenyészetet peé roléterrel, vagy alacsonyabb forráspont«! benzinnel extraháljuk. Az extraktumor vízmentes nátrium szulfáttal megszáritjuk és bepároljuk. A visszamaradó fehér, kristáiyos anyag főtömege az esetleg csekély mennyiségben át nem alakult choleszterin mellett 7-oxicholeszterin és 4.5 choie sztenon. E termékek egymástól való elválasztása a szokásos módon írakcionált kristályosítással, vagy' AI2O3 oszlopon történő chromatografálással történik. A piridinbontó baktórium a következő módon izolálható : a példában a leirt táptalajból, amelyből azonban a cholesztérint kihagytuk, Erlenmayer-lombikba 50 cmó-t lőttünk s azt 1.5 atm, gőznyomáson autoklávban sterilizál Juk. Az igy készült táptalajt beoltjuk kertifölddél és 30u-os termosztátba helyezzük. Az 5-6. napon a piridin lebontása megkezdődő, a tenyészet Nessler reagenssel erős ammóniák reakciót mutat. A kultúrát a 6. napon átoltjuk s ezt a műveletet legalább ötször megismételjük. Az utolsó átoltás után a tenyészetből 1 cm 3-t steril vezetékvizzel hatszorosára hígítunk s az igy készült elegyet azonos- térfogatú 2%-os agaroldathoz adjuk, amelyből előzőleg 0.2% piridint oldottunk. A piridinagarból a legtöbb esetben kiíejlő-
