140151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás virusz proteinekelválasztására nem viruszos proteinekből

Megjelent I95ßu«s4augusztus hó 15-én. *—*"***"^"******~-**^**** '— 1 --rrrniri i i ni. ,. • -íri irii i mi) -r iniimii nm um m . i -n~ "TCI ii "*' — —^j— • ••• •• ••—>——•»• ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 140151 SZÁM aOh «OSZTÁLY C-6155 ALAPSZÁM — (IV/h2

) Eljárás virusz-proteinek elválasztására nem viruszos proteinekből. American Cyanamid Company eég, New-York, mini Cox Herald Rea és Aiston Stewart vegyészek jogutódja A bejelentés napja: 1947 szeptember 26-ika. É. A. E. Á.-beli elsőbbsége: 1946 október 1. A találmány eljárás, amellyel a virusz proteineket a nem viruszos proteinektől annyira el lehet választani, hogy a megtisztított viruszt az emberi testbe lehet fecskendezni. Vizsgálatok azt mutatták, hogy az aktív, vagy inaktív virusz beadása az illető kór ellen hatásos, keringő antitestek titerét növeli és hogy az átlagos antitest reakció arányos, noha nem egyenes arányban, a beadott virusz mennyiségével. Az ily vakcinák ipari előállítása függ attól, hogy a viruszt nagy mennyiségben és idegen proteinektől annyira lehessen mentesíteni, hogy hátrányos reakció előidézése nélkül lehessen a testbe fecskendezni. A viruszokat csak élő szövetek jelenlétében lehet szaporítani. Többnyire termékenyített és keltetett tojásokban szaporítják, amelyekből a magzatot burkoló allantoidális hártyából, vagy folyadékból, a tojás sárgájának burkolóhártyájából vagy magából az embrióból vonják ki. Minthogy sokan érzékenyek a tojásproteinre, mások pedig a tojásproteineket tartalmazó vakcinák beadása után válnak érzékennyé, az érzékenységet okozó proteineket a viruszoktól, veszteség vagy hatásosságuk csökkentése nélkül el kell tudni választani. A viruszokat állatokban, •ezek agyvelejében, lépében, májában és más szerveiben, vagy vérében is tenyésztették és ezekből kivonva használták vakcinák készítésére. Ekkor is el kell távolítani a virusz mellett lévő proteineket, nehogy, a kezelt személyek érzékenyekké váljanak. A viruszokat különféle módon koncentrálták és igyekeztek mellőlük az idegen proteineket eltávolítani, hogy biztosabb és hatásosabb im: munizáló vakcinákat lehessen készíteni. Az egyik módszer a fertőző allantoidális folyadék ismételt fagyasztásából és felengedéséből áll, miáltal a hatásos virusz kicsapódik. A viruszt különféle adszorbeáló anyagokkal, pl. vörös vérsejtekkel, kalcíumf'oszfáttal, alumínium-, cinkés magnéziumhidroxiddal adszorbeáltatták is. A lecsapott viruszt kimosással, vagy más móddn vonjuk ki az adszorbeáló anyagból. A legsikeresebb eljárás szerint nagy fordulatszámú centrifugákkal végezték az elkülönítést és azt állították, hogy 10%-nál kevesebb viruszproteint és 90%-nál több, kis molekulasúlyú, idegen proteint tartalmazó, allantoidális folyadékból annyira lehet tisztítani, hogy az idegen protein az egész protein 5%-iánál kevesebb. Habár ezen módszerek némelyikét virusz vakcinák tisztítására iparilag is alkalmazták, sok hátrányuk van, főképpen pedig az, hogy nem lehet velük lényegileg idegen-proteinban mentes terméket előállítani, emellett pedig kis termelési hányaddal dolgoznak. A centrifugálás, noha valószínűleg a legjobb módszer, a centrifuga a nagy sebesség folytán könnyen romlik és teljesítőképessége is csekély. A tojásban tenyésztett influenzaviruszt az idegen proteinektől megállapításaink szerint el lehet különíteni, a viruszt vizes szuszpenzióból oly körülmények mellett csapjuk le, hogy a virusz az idegen proteinek nagy részétől megszabadul és emellett erősen koncentrálódik is. A csapadéknak további tisztítása az alább leírt módon lehetővé teszi a vakcinák előállítását számbavehető viruszveszteség nélkül az eddig ismert eljárások szerintinél kisebb idegen proteint art alommal. A találmány szerint a virusz proteineket úgy választjuk el a nem viruszosoktól, hogy mintegy 15—40 térfogatszázalék szerves proteinlecsapószert adunk, mialatt a hőmérsékletet 5 C°-nál mélyebben tartjuk, ú viruszos és nem viruszos proteinek hideg vizes szuszpenziójához, mire a lecsapódó viruszproteineket elkülönítjük a nem viruszosoktól. Az eljárás egyik megvalósítási módja szerint mintegy 15—40 térfogatszázalék alacsonyabb alkoholt, pl. metil-, vagy etilalkoholt