126648. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipofizishormonok különválasztására
126 Ezután a meíanolos kivonatokat, melyeket a kivonatolási maradéktól való mindenkori különválasztásuk után ecetsavval semlegesítünk és jégszek-5 rényben őrzünk, egyesítjük és az oldószertől vákuumban mentesítjük. Vá^ kuumban végzett szárítás után 14 g maradékot kapunk. Állatkísérletben nem volt kimutatható hipofíziselőle-10 benyhormónnak semmiféle hatása sem, azonban a kiindulási anyagban jelenlevő hátsólebenyhormonok (vérnyomást fokozó és az anyaméhre ható hormon) teljes hatásossága itt ismét ér^ 15 vényesült. Az ammonias 80 <y0-os metanollal végzett háromszori kivonatolás után kapott maradékot ugyancsak vákuumban szárítottuk, amikor is 40 g súlyú ter-20 méket kaptunk. Kivett próbából szokásos módon főzéssel előállított kivonat az elszigetelt anyaméhre már semmi hatást sem gyakorolt, ugyanígy elmaradt a vérnyomásra gyakorolt hatás 25 is. Ezzel szemben az ismert módon előállított ecetsavas kivonat az acetonszárazporuak teljes tireotrop hatásosságát mutatta, nevezetesen 15000 tengeri nyúl egységet. A kivonatnak ezenfelül egy-30 általában nem volt mérgező hatása sem. 3. példa: 20 g tireotrop hormont az egész ser-Léshipofízisből kapott készítményt, mely 35 mg-onként 10,7 tengerinyúl egységet (íny. e.), összesen tehát 215.000 tny. e.-t, emellett azonban még a hátsólebéhynek 15.000 Vöegtlin-egységnyi (v. e.) vérnyomásfokozó hormonját és 40 15.000 nemzetközi egységnyi (n. e.) anyaméhre ható hormonját tartalmazza, 400 cm3 vízben oldunk és az egészet 12 cm3 10 o/o-os ammóniával fenolftaleinnel szemben lúgossá tesszük. 45 Ezt az oldatot 1600 cm3 jéggel hűtött metanolba kavarjuk, melyhez előzőleg 10 cm3 10 o/o-os ammóniát és 1 g káliumacetátot adtunk. A képződő csapadékot azonnal lecentrifugáljuk és azt 50 azután ismét 200 cm3 vízben oldjuk, mely 4 cm3 lQo/o-os ammóniát tartalmaz. Ezt az oldatot jéggel hűtött 800 cm3 , 5 cm 3 10%-os ammóniát és 1 g káliumaeetátot tartalmazó metanolba 55 kavarjuk. A csapadékot ismét azonnal leccnlrifugáljuk, 100 cm3 , 3 cm 3 10%-os ammóniát tartalmazó vízben újból felis 4 8. 3 oldjuk és az oldatot jéggel hűtött 400 cm3 , 5 cm 3 10%-os ammóniát és 0.5 g káliumacetátot tartalmazó metanolba (,0 kavarjuk. A lecentrifugált csapadék már most a vérnyomásra és az anyaméhre ható hátsólebenyhormonoktői mentes. A csapadékot vízben oldjuk, kongosavanyú kémhatásig sósavat adunk hozzá 65 és gyengén sósavas aceton 10-szeres térfogatával kicsapjuk. A csapadékot leszívatjuk, acelonnal és éterrel mossuk és vákuumban szárítjuk, így 7 g vízben könnyen ol- 70 dódó tiszta fehér port kapunk. Az élettani vizsgálat eredményei szerint e termék a vérnyomásra és az anyaméhre ható hátsólebenyhormonoktól mentes és tartalma mg-onként 30.6 tny. e., 75 összesen tehát 213.000 tny. e. Az egyesített metanolos oldatokat ecetsavval semlegesítjük, az oldószert vákuumban 35 C° fürdőhőmérsékleteii ledesztilláljuk és a maradékot vákuum- so ban szárítjuk. így 22.7 g száraz termékel kapunk, mely mg-onként 0.5 v. e., összesen tehát 11.300 v. e. vérnyomást fokozó hormont és ezenfelül 11.300 n. e. anyaméhre ható hormont gs tartalmazott. 4-. Példa: . Őrölt egész sertéshipofízisekből 5 kg-ot tömény ammóniával fenolftalein- 90 nel szemben lúgossá teszünk és 13 liter etanolt adunk hozzá, az egészet 12 órán át kavarjuk és leszivatjuk. A kivonatolás maradékából és 2.6 liter vízből pépet készítünk, ezt követőleg a keverék- 95 hez 13 liter etanolt adunk, az egészet 12 órán át kavarjuk, leszivatjuk és a "maradékot ecetsavas etanollal és semleges acelonnal kimossuk és szárítjuk. Ez a maradék 890 g. E termék l°/o~os; 100 ecetsavval végzett háromszori kivonatolása olyan kivonathoz vezet, mely a kiindulási anyagban jelenlevő tireotrop hormon összmennyiségét, nevezetesen 400.000 tengerinyúl egységet tartalmaz. 105 Az egyesített ammonias etanolkivonatokat késedelem nélkül előzetes semlegesítés mellőzésével 30 C°-on vákuumban bepárologtatjuk. 400 g szörpöt kapunk, mely mg-onként 1.8 n. e. oxitocint, te- 110 hát a kiindulási anyagban jelenlevő hátsólebenyhormon összmennyiségét tartalmazza. Az elő- és hátsólebenyrészlet feldolgozása az 1. példa szerint történik.
