103141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás állati és növényi szövetek és szervek szétbontására
— 8 -trifugáljuk. A felszállott és a szuszpenzióban maradt részt mindannyiszor leöntjük. Az így kapott egyes frakciókat a keresett aLkátrészre vizsgáljuk meg. A keresett al-5 katrészt tartalmazó szuszpenzióhoz bőséges étert adunk, addig centrifugáljuk, míg leülepszik és megszárítjuk, majd finomabb frakciónálásnak vetjük alá. Ha pl. a keresett anyag abban a frakcióban volt, mely 10 10%-os éterkloroformmal való centrifuga* lásnál sznszpenzióban maradt, akkor ezt most egymásután 15, 14, 13, 12, 11, 10%-os éterkloroformmal centrifugáljuk. Azután megvizsgáljuk, hogy melyik frakcióban ta-15 lálható a keresett alkatrész a legtisztább alakban. Az izommagok izolálása céljából az előkészített szervport (20 g) 300 cm8 -es Erlenmeyer-lombikban rövid, erős összerázás-20 sal 20% étert tartalmazó 150 cm8 kloroformban szuszpendáljuk. A porszuszpenziót most 1 óra hosszat két centrifugáló csőben, melyeknek kb. 90 cms térfogatuk van, jól szellőztetett, azaz mozgás közben 25 fel nem melegedő centrifugáiéban centrifugáljuk (a centrifugáiéban levő hőmérséklet kb. 23°) A centrifugáló csöveket azonban az elpárolgás veszélye miatt jól záró fedőkkel kell elzárni. Centrifugálás után 30 a fent leülepedett porlepényt lapátkával óvatosan felaprózzuk, az üvegcső oldalától elválasztjuk és a felette álló folyadékkal együtt az üledékről üvegpoihárba öntjük. Az üledékhez már most rögtön, mielőtt 35 beszáradna, 15%-os éterkloroformot adunk. A leöntött részt, amely főképp protoplazmából áll, Erlenmeyer-lombikban ismét szuszpendáljuk és újból félóra hosszat centrifugáljuk, hogy a magával ragadott ma-40 goktól elválasszuk. A felette álló folyadék leöntése után az összes üledékeket 90 cm8 g centrifugáló csőben egyesítjük és 15%-os éterkloroformmal 4 óra hosszat centrifugáljuk. A felette álló folyadék leöntése 45 után az üledéket 4 óra hosszat 10%-os éterkloroformmal kisebb centrifugáló csőben centrifugáljuk. A szuszpenzióban maradt részeket és az esetleg fent leülepedett porlepényt leöntjük, étert adunk hozzá és 50 kis centrifugáló csőben addig centrifugáljuk, míg le nem ülepszik. Az üledéket a centrifugálóban még kétszer mossuk éterrel és azután kénsavas szárítóban éjjelen át megszárítjuk. A termelési hányad 0.32J 55 majdnem tiszta mag. Hogy a magokat még tisztábban kapjuk meg, a port még egymásután 15, 14, 13, 12, 11, 10%-os éterkloroformmal mindannyiszor 4 óra hoszsz.at centrifugáljuk. Az így kapott egyes frakciók külömböző szennyezési tartal- 60 mukban különböznek. A legtisztább magfrakciót megszárítjuk és azzal az éterkloroformkeverékkel, melynél leülepedett, az üledéket pedig azzal az eleggyel, melynél éppen még szuszpenzióban maradt, újból 65 4 óra hosszat centrifugáljuk. Termelési hányad kb. 0.2 g. Hogy mely elegyek között fekszik a legtisztább frakció, az attól a hőmérséklettől függ, mely a centrifugálás közben a centrifugáló edényekben uralkodik 70 Az egyes frakciók magtartalmát úgy vizsgáljuk meg, hogy a frakciókból vett mintákat éteres szuszpenzióban a tárgylemezre felkenjük, a magfestési eljárással megfestjük és 1 %:-os naftolzöld oldattal 75 5 percig utánafestjük. El nem választott szövetpor és tiszta protoplazma zöld színűvé válnak, míg az ugyanígy kezelt magszuszpenziók mély ibolyaszínt mutatnak. 2. Lehetőleg friss disznópajzsmirigyeket 80 egyenként kb. —70°-ú szénsavéterbe helyezünk és azután mullzacskóba téve őket, kénsavszárítóban felakasztjuk, mely szárítóban kb. 0.2 mm higanyoszlopmagasságnak megfelelő vákuumot létesítünk és a 85 Vákuumot 8 napig ezen a magasságon tartjuk. Az ilymódou fagyasztott állapotban megszárított mirigyeket azután 'kivesszük és kb. 1 tm3 -nyi darabokra vágjuk, miközben a zsírt 'és a durva kötőszövetet, ameny- 90 nyire lehetséges, eltávolítjuk. 'Az így felaprózott mirigyeket durván őrölő malomban megőröljük és sziták sorozatán hajtjuk át, ahol is a legfinomabb szita szemnagysága 0.5 mm. A 'durva port, mely a legfinomabb 95 szitán nem megy 'át, ismét megőröljük és újra átszitáljuk. Ezt 'az eljárást addig ismételjük, míg az egész mirigyanyag a legfinomabb szitán át nem haladt. 100 g-t az így kapott mirigyporból lVa 100 literes palackban éterben szuszpendálunk és a finomabb port ülepítéssel a durvábbtól elválasztjuk. E célból az üveget összerázás után a kihasználható esési magasság (a távolság 'az éter felszíne és a kis 105 idő múlva képződő 'üledék felszíne között) centiméterenként 0.1 percig állni hagyjuk és az éterszuszpenziót 'az üledékről (I. üledék) szívócsővel 3 literes palackba szívjuk. Ezt az eljárást háromszor ismételjük 110 meg. A 3 literes üvegben, melynek 18 cm-nyi kihasználható esési magassága van, a leszívott szuszpenziókat 12 óra hosszat állni hagyjuk. Az ezen idő után keletkezett üledék (II. üledék) nagyrészt (kolloid) 115 tüszőtartalomból (Follikelinhalt), míg 'az 1. üledék főképp kötőszövetből és tüszőfalsejtekből áll. 12 óra lefolyása után a
