Dr. Kassai Tibor - Dr. Murai Éva szerk.: Parasitologia Hungarica 8. (Budapest, 1975)
Anyag és módszer Vizsgálatainkat CFY patkányokon végeztük. Az állatok fertó'zése egérben fenntartott Trichinella spiralis törzs pepsin-sósav oldattal décapsulait, mosott preadult lárváival történt, gyomorszondán át. A fertőző dózis 10 lárva/testsúly g volt. A direkt migrációs vizsgálatokban lépsejteket, ill. esetenként steril parafinolajjal provokált peritoneális exsudatum-sejteket, vagy az állatok lépéből kivágott 1 mm élhosszúságú darabkákat alkalmaztunk. A direkt migrációt részint kapilláris technikával, GEORGE és VAUGHAN eredeti módszerének (9) DAVID és DAVID által leírt változata szerint (6), részint lépfragment technikával, SVEJCAR és munkatársai szerint (22) vizsgáltuk. A migráció gátló faktor (MIF) eló'állitása és indirekt tesztelése BLOOM és BENNETT szerint történt (2). Utóbbi eljáráshoz a lymphocytákat a mesenterialis nyirokcsomókból nyertük, és a felülúszókat normál patkány lépfragmentjein teszteltük. Tápfolyadékként Eagle's Minimal Essential Médiumot (MEM) használtunk, a kapilláris módszerben 10%, a fragment módszerben 20% a lymphocyta kultúrák esetében pedig 5% fetalis borjúszérum (FCS) kiegészítéssel. A sejtek életképességét trypankék exkluzióval vizsgáltuk. Az elpusztult sejtek aránya általában nem haladta meg a 10-15%-ot. Lépsejtszuszpenzió készítésekor a vörösvértesteket 0,83%-os ammóniumkloriddal hemolizáltuk nem fajlagos gátlás elkerülése végett. Egy-egy állatból legalább 4-6 parallelmintát készítettünk és az antigént tartalmazó kamrákban észlelt migrációs zónák planimetriás értékeit saját antigénmentes kontrolijukkal hasonlítottuk össze a migrációs index (MI) kiszámításakor (2). M j a migráció planimetriás értéke antigén jelenlétében a migráció planimetriás értéke a kontroll médiumban A lépfragmenttel végzett vizsgálatokban a kiültetett lépdarabkát és a belőle kirajzó sejtek által létrehozott migrációs mező határvonalát körnek tekintve a körgyűrű alakú migrációs zóna sugarát a következő képlettel számítottuk ki (22): R (a körgyűrű sugara) = 0, 564 (W 2 "]^V* ahol T^ = a migrációs terület planimetriás értéke, T = a lépfragment planimetriás értéke. A lépfragment módszerben a Ml-et a planimetriás értékek hányadosa helyett a megfelelő R értékek hányadosa adja. A migrációs tesztekben metabolikus lárvaantigént (MLA) használtunk. Ennek előállítására az izolált, mosott, felületi fertőtlenítésen átesett preadult lárvákat 48 óra hosszat inkubáltuk Hanks' BSS-ben vagy MEM-ben. A 10,000 lárvaekvivalens/ml-re beállított MLA fehérjekoncentrációja átlagosan 5,000 ,ug/ml volt. A fehérjetartalom meghatározása 280 nm-es ultraibolya huUámhosszon UNICAM spektrofotométerrel történt. Eredmények Az antigén esetleges sejt-toxikusságának megállapítására végzett előzetes vizsgálatok során a 2, 000 lárvaekvivalens/ml koncentráció bizonyult a legnagyobb nem toxikus töménységnek. Ezért az első kísérletsorozatban ilyen antigén-koncentrációt létesítettünk a migrációs kamrákban. Első kisérletünkben a patkány trichinella-fertőzések lefolyása során a migrációgátlás dinamikáját kívántuk vizsgálni. A fertőzés egymást követő szakaszaiban lépsejtek, ill. peritoneális exsudatum-sejtek felhasználásával a kapilláris technikát, valamint a lépfragment módszert egyaránt alkalmaztuk. Az 1. ábra a 3 módszerrel nyert eredményeket együttesen szemlélteti. A kontroll, egészséges állatokon nyert értékek szórásának megfelelően csak a 85% MI alatti sávot értékeltük gátlásként.
