Hidrológiai Közlöny 2007 (87. évfolyam)
6. szám - XLVIII. Hidrobiológus Napok: Európai elvárások és a hazai hidrobiológia Tihany, 2006. október 4–6.
59 HIDROLÓGIAI KÖZLÖNY 2007. 87. ÉVF. 6. SZ. 310) segítségével vizsgáltuk. Az így kapott szekvenciákat MEGA 3.1 programcsomag segítségével illesztettük és a GeneBank adatbázis már ismert szekvenciáival (BLAST) hasonlítottuk össze. 3. Tenyésztéstől független vizsgálatok (T-RFLP elemzés) A terminális restrikciós fragmenthossz polimorfizmus (T -RFLP) vizsgálat során az elszaporított 16S rDNS szekvenciát restrikciós enzimmel/enzimekkel hasítjuk, a hasítási mintázat alapján megfelelő adatbázis segítségével közvetve, megközelítőleg azonosítani tudjuk a csúcsokhoz tartozó taxonokat PAT programcsomag (Kent és mts., 2003) felhasználásával. Mind az R, mind az Ú vizekből 14-14 liter mennyiséget 0,2 |im pórusméretű membránszűrőn szűrtünk, majd a szűrőről Ultra Water Clean DNA Kit (MOBIO) segítségével közvetlenül DNS-t izoláltunk. A különböző biofilm mintákból Ultra Clean Soil DNA Kit (MOBIO) használatával nyertünk DNS-t, majd minden mintából 16S rDNS specifikus PCR reakciót végeztünk (27F-TET és 519R primerpár). A terméket ezután Alul, BsuRI, HinóI, Mspl restrikciós enzimekkel 37 °C-on 3 órán keresztül emésztettük. A fragment elemzést ABI Prism I M 310 Genetic Analyser (Perkin Elmer) berendezéssel végeztük. Eredményeinket a GeneScan programcsomag segítségével értékeltük. Eredmények és értékelésük 1. Elektronmikroszkópos vizsgálatok A gumifelületek biofilmjében komplex mikróbatársulás volt megfigyelhető: kokkoidális sejtek és pálcikák, sok fonalas prokarióta sejt (1. ábra a. és b.), de előfordultak mikrogombák és valószínűsíthető kovaalgák jelenléte is. 1. ábra Biofílmekről készült pásztázó elektronmikroszkópos (SEM) felvételek (a. kokkuszok és pálcák, b. fonalas prokarióta szervezetek, c. bimbózó Hyphomicrobium sejtek) A termékvezetékből származó fehéres nyálkarétegben (EK) a fonalas baktériumok ritkábbak. Érdekes, hogy Hyphomicrobium-okra jellemző bimbózó formák csak ebből a biofilmből mutathatók ki (/. ábra c.). A Hyphomicrobiumok aerob kemoheterotróf szervezetek, vizekben szívesen rögzülnek szilárd felületekhez. Irodalmi adatok szerint oligotróf vizek baktériumközösségeinek 25 %-át is kitehetik (Rao ésNair, 1998). 2. Vízminták tenyésztéses alapon történő értékelése A vízből izolált 109 baktérium taxonómiai pozícióját és a csoportok előfordulási gyakoriságát az /. táblázat tartalmazza. A két vízmintában lévő főbb baktérium csoportok vízmintánkénti megoszlását a 2. ábra szemlélteti. A vízminták baktériumközösségeit az aerob, kemoorganotróf ß-proteobakteriumok dominanciája jellemzi, bár mennyiségük alacsonyabb a kimerülőben lévő gyantáról származó vízben. A y-proteobaktériumok aránya nagyjából azonos a két vízmintában, ugyanakkor a kis G+C tartalmú Gram-pozitív baktériumok csak a regenerált gyantáról származó vízből, míg az a-proteobaktériumok csak a kimerült gyantáról származó vízmintából voltak kimutathatók. 0: víz a regenerált gyantáról R: víz a kimerült gyantáról a-proteobakt. ß-proteobak. y-proteobatö. alacsonyG+C főbb baktériumcsoportok 2. ábra Nagytisztaságú ipari vízből nyert baktériumtörzsek megoszlása a főbb baktérium csoportok és a vízminták szerint Az összes, vízből izolált baktériumtörzs 49%-át a ß-proteobaktériumokhoz tartozó Delftia acidovorans tette ki, azonban a Chromobacterium violaceum és a Ralstonia insidiosa is jelentős számban képviseltette magát. A Ralstonia nemzetséget először radioaktív oligotróf környezetekből izolálták, képesek biomineralizációs és kemoszorpciós folyamatokra hidroxidokat, karbonátokat, vas- és mangán oxidokat képezve (Kulakov és mts., 2002). I. táblázat. A vízmintákból kitenyészthető baktériumcsoportok mérete és filogenetikai rokonsága a 16S rDNS szekvencia analízis alapján Filogenetikai csoport Legközelebbi rokon baktérium taxon Parciális 16S rDNS szekvencia hasonlósági % Fenon méret (db) a-proteobaktériumok Agrobacterium rhizogenes 163C 98 1 a-proteobaktériumok Novosphingobium hassiacum W-51 98 1 ß-proteo baktériumok Delftia acidivorans MC 1 100 53 ß-proteo baktériumok Ralstonia insidiosa CCUG 46388 100 8 ß-proteo baktériumok Ralstonia pickettii 31 v3 rm 100 1 ß-proteo baktériumok Chromobacterium violaceum 31532 98 11 y-proteo baktériumok Stenotrophomonas maltophilia E2 99 3 y-proteo baktériumok Acinetobacter johnsonii Pl52 99 2 y-proteo baktériumok Enterobacter aerogenes CAL 3 100 10 y-proteo baktériumok Serratia marcescens HokM 99 1 y-proteo baktériumok Serratia marcescens ssp. sakuensis KRED 100 13 alacsony G+C Bacillus cereus ATCC 25621 NCIMB 10437 99 5 Az izolált baktériumok jelentős része kis szervesanyagkoncentrációjú környezetekben általában jellemző (Chen és mts., 2004). Gyakran képesek aromás vegyületek bontására, több közülük H 2 autotróf. Megjegyezzük, hogy az ioncserélő műgyanták egy részében a térhálósítást divinilbenzollal érik el, ami a Delftia fajok számára szén- és elektronforrásul szolgálhat. A H 2, mint elektrondonor forrása még tisztázásra vár, de pl. vaskorrózió esetén felszabadulhat (Gu és Mitchell, 2001).
