Hidrológiai Közlöny 2003 (83. évfolyam)
XLIV. Hidrobiológus Napok: "Ritkán vizsgált és különleges vizek" Tihany, 2002. október 2-4.
121 Filta-Max nevű speciális szűrővel nagy mennyiségű (nyers vízből 50 liter, ivóvízből 380-500 liter) vizet szűrünk. A szűrő jellegzetessége, hogy 60 db középen lyukas szivacskorongból áll, melyeket egymásra helyezve egy csavarral fognak össze. Névleges pórusmérete 1 mikrométer. A víz laterálisan áramlik a szivacson keresztül a középső lyuk iranyába. A szűrés 1-2 Ba nyomáson, 3-4 liter/perc áramlási sebességgel történik. A szivacsból a ciszták, oociszták visszanyerése dekompresszióval és pufferoldattal való átmosással történik. Ha a víz turbiditása túl nagy, a kémiai flokkulációs technikát alkalmazzuk a protozoonok dúsításához. A 10 liternyi mennyiségű vízmintához kálcium-kloridot és nátrium-bikarbonátot adunk. A pH-t 10-rc állítjuk be nátrium-hidroxid hozzáadásával. A keletkezett pelyhes csapadék az ülepedés során magával ragadja a cisztákat, oocisztákat. 4 óra elteltével leszívjuk a felülúszót és 10 %-os szulfonsav adagolásával feloldjuk az „üledéket". Centrifugálással tovább koncentráljuk a mintát, hogy alkalmas legyen az immunomágneses szeparációra. 2. Második dúsítás: A szűrés után immunomágneses szeparációt végzünk. A módszer lényege, hogy mágneses gyöngyökhöz kapcsolt Cryptosporidium és Giardia specifikus ellenanyagot adunk a mintához, ezután mágnessel kiemeljük a mintából a protozoon-mágneses gyöngy komplexet. A protozoonokról a mágneses gyöngyöt sósav hozzáadásával választjuk le. 3. Azonosítás: Az azonosítást Cryptosporidium és Giardia specifikus ellenanyaghoz kötött F1TC festéssel, epifluorescens, differenciál interferencia kontraszttal működő mikroszkóppal végezzük. A festést spécifikusabbá tehetjük DAP1 DNS festéssel is (14) A Giardia és Cryptosporidium fajok listája napjainkban egyre bővül. Az embert csak a Giardia lamblia és Cryptosporidium parvum fajok betegítik meg. Ez az EPA módszer arra nem alkalmas, hogy pontos fajmeghatározást végezzünk. A megadott eredmények csak a Giardia sp és Cryptosporidium sp. jelenlétét jelzik. Pontos fajmeghatározás PCR technikával lehetséges. Nemzetközi gyakorlatban az ivóvízre vonatkozó határérték 1 db/10 liter oociszta illetve ciszta. Ezt meghaladó értéknél a mikroszkópos vizsgálatot pontos fajmeghatározás (PCR) és fertőzőképesség meghatározás (pl. egérteszt) követi. Eredmények és megvitatásuk: Eddig 4 karsztforrást, 4 strandot és 7 vízmű nyers és ivóvizét vizsgáltuk meg. A minták száma összesen 30, melyekből 13 bizonyult Giardiával és 7 Cryptosporidiummal fertőzöttnek. Ezen belül I karsztforrás, 4 nyers víz, 4 ivóvíz és 4 strandvíz volt Giardiával, valamint 1 nyers víz, 1 ivóvíz és 4 strandvíz volt Cryptosporidiummal fertőzött. A mikroszkópos vizsgálati eredményeinket dr. Rachel Chalmers, a walesi Cryptosporidium referencia labor vezetője is megerősítette. A/on strandról vett vízminták, melyekben nagy mennyiségű cisztát és oocisztát találtunk, fajmcghalározás céljából PCR feldolgozás alatt állnak. Vizsgálatainkat, az országos felmérést folytatni szeretnénk, hiszen a fenti adatok jelzik, hogy a két Protozoon jelenléte a vizekben Magyarországon is gondot jelenthet. Számos cikk számol be különböző európai és nem európai országok vizeinek C.ryptosporidiumma\ való fertőzöttségéröl (pl. Németország, Görögország, Anglia, USA, Japán, stb.) (15, 16). Szeretnénk adatokat gyűjteni Magyarország területére vonatkozólag is és az esetleg felmerülő problémákat megoldani. MklUv MintaDátum < rypto(fúrdbi sp. helyek típus spórid hun sp. Karaztviuk 1 Nyers víz 2000.1». 10. 0/50 liter 1 /50 liter Ivóvíz 2000. 11. 13. 0/380 liter 0/380 liter 2 Ivóvíz 2001.04. 09. 0/500 liter 0/500 liter 3 Ivóvíz 2001.04. 09. 0/500 liter 0/500 liter 4 Ivóvíz 2001. 04. 09. 0/500 liter 0/500 liter Vízmüvek 5/a Nyers víz 2001. 03. 22. 0/10 liter 0/10 liter Ivóvíz 2001. 03. 22. 0/380 liter 1/380 liter S/b Nyers vlz 2001. 1)9. 10. 0/50 liter 3/50 liter Ivóvíz 2001. 09. 10. 0/500 liter 6/500 liter S/c Nvers víz 2002. 03. 25. 1/50 liter 12/50 liter Ivóvíz 2002. 03. 25. 13/5001iter 0/500 liter 5/d Nyers víz 2002. 1)8. 12. 0/20 liter 0/20 liter Ivóvíz 2002. 08. 12. 0/500 liter 1/500 liter 6 Nyers víz 2002. 09. 10. 0/50 liter 4/50 liter Ivóvíz 2002. 09. 10. 0/500 liter 0/500 liter 7 Nvers víz 2002. 06. 10. 1 '20 liter 27/20 liter Ivóvíz 2002. 06. 10. 0/500 liter 2/500 liter 8 Nyers víz 2002. 04. 08. 0/50 liter 0/50 liter Ivóvíz 2002. 04. 08. 0/500 liter 0/500 liter 9 Nyers víz 2002. 05. 07. 0'50 liter 0/50 liter Ivóvíz 2002. 05. 07. 0/500 liter 0/500 liter 10 Nyers víz 2002. 05. 21. 0'50 liter 0/50 liter Ivóvíz 2002. 05.21. 0/500 liter 0/500 liter 11 Nvers víz 2002. 05.21. 0 '50 liter 0/50 liter Ivóvíz 2002. 05. 21. 0/500 liter 0/500 liter Strandok 12/a Fürdővíz 2002. 06. 03. 78/5,7 liter 2/5,7 liter 12/b Fürdővíz 2002. 07. 02. 69/5 liter 3/5 liter 13 Fürdővíz 2002. 07. 02. 5/10 liter 17/10 liter 14 Fürdővíz 2002. 07. 02. 1/10 liter 1/10 liter 15 Fürdővíz 2002. 07. 02. 0/10 liter 0/10 liter 7. 9. Irodalom: David Dawson: Chainpdeii and Chorleywood Food Research Association Guideline 21(19'>8) magyar nyelvű fordítása ßlythe S.: Travel Health Information Service. Public Health Fact Sheet: Giardiasis Jurányi R.: A fertőző betegségek általános és részletes járványtana. Medicina, Budapest (1997), 252-254. 5. Jurányi R.: Részletes járványian (fertőző betegségek). OTE, Egészségügyi Főiskolai Kar (1992), 107-111 6. Gergely /,.: Orvosi mikrobiológia. Semmelweis Kiadó, Budapest (1999), 436-438., 441-442. Basic Biology of Cryptosporidium (Divison of Biology, Kansas State University), Updated. 11 January 1999. Felicia Draft Cryptosporidium Home Page, Cryptosporidium fact sheet, Last modified. July 23 1999. Andrik P.: A Giardia lamblia terjedése ivóvíz útján. Irodalmi áttekintés 1. A viz eredetű giardiázis (1987), Hidr. Kőzi. 5-6: 316-322. 10. United States Environmental Protection Agency, Office of Water Washington, DC 20460, EPA-82 1 -R-99-006 , April 1999, Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by 1 iltration/lMS/FA 11. Kádár M. : Microbiological safety of watei supplies. In: Deininger R A. et al (eds ): Security of public water supplies, Kluwer Academic Publishers (2000) 185-195. 12. Andrik P., Kőműves Zs.: A Giardia lamblia terjedése ivóvíz útján V A hazai kutatás eredményei (1989), Hidrológiai Közlöny 6: 336-339. 13. Andrik P : A Giardia lamblia terjedése ivóvíz útján Írod áttek. II A Giardia ciszták kimutatása vízből (1988), Hidr. Közi. 2: 114-119. 14. Hegedűs J.. Szigethi Cj.: Cryptosporidium oociszta előfordulásának vizsgálata a főváros ivóvizéből (1997), Bp. Közegészs 4: 336-339. 15. Tsushima. Y., Karanis. P.. Kamada, T.. Nagasawa. H., Xuan, X., Igarashi. /., Fuzizaki.K.. Takahashi. E., Mikami, T. (2001): Detection of Cryptosporidium parvum oocyst in environmental water in Hokkaido, Japan. ITie Journal of Veterinary Med. Sc.63 (3): 233-236 16. Karanis, P., Papadopoulou, C., Kimura. A., Economou, E.. Kourenti, C., Sakkas.H. (2002): Cryptosporidium and Giardia in natural, drinking and recreational water of Northwestern Greece Acta hydrochim Hydrobiol. 30(1), 49-58 Judit Plutzer, Andrea Torokne: First data on Cryptosporidium and Giardia in Hungarian Water Supply Abstract: A survey was begun to determine the presence of Cryptosporidium and Giardia in Hungarian fresh and drinking waters The water of 4 karst springs, 4 beaches and 7 water treatment plants were examined (altogether 30 samples). 13 samples were contaminated by Giardia and 7 samples were contaminated by Cryptosporidium. We used the next procedure for examining the water samples: The first step of our examination is the concentration by filter module (Filta Max ). 50 1 was filtered from raw and 380-500 1 from treated waters If the water turbidity was too high, we used the flocculation protocol. After concentration, oocysts and cysts were isolated from sample using immunomagnetic separation (IMS) Organisms were labelled with fluorescently conjugated monoclonal antibidies (F1TC) and the nuclei were stained by DAPI. Cryptosporidium oocyst and Giardia cysts were detected by epifluorescence and differencial interference contrast microscopy. Keywords: Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, EPA 1623 method Hungar survey
