Fogorvosi szemle, 2015 (108. évfolyam, 1-4. szám)
2015-03-01 / 1. szám
14 FOGORVOSI SZEMLE ■ 108. évf. 1. sz. 2015. előnyt jelentenek a hagyományos SPR szögeltolódás-mérésekkel szemben. FT-SPR vizsgálatok esetén a beesési szöget fix értéken tartva mérjük a reflektanciát, a fény közeli-infravörös spektrumában. így kerülnek megállapításra a különböző hullámhossz-tartományokban megjelenő intenzitások, melyekből a kötődések kialakulására vagy bomlására lehet következtetni [6, 7], A módszer segítségével a biomolekuláris kölcsönhatások kinetikája valós időben nyomon követhető, így a kialakuló vagy felbomló kötések és kötődések azonnal detektálásra kerülnek, azok méréséhez egyéb beavatkozás nem szükséges. Külön előnyös tulajdonság, hogy a molekulák kötődése sem igényel egyéb jelölési feladatot, hanem közvetlenül a kötődés kialakulása biztosítja a mérendő jelet, így az eljárás nagy érzékenysége még a gyenge felületi kölcsönhatások vizsgálatát is lehetővé teszi. Az FT-SPR Spektroszkópiát más bioanalitikai módszerekkel összehasonlítva (PM-RAIRS, QCM-D), alacsony koncentrációk detektá-7.aj ábra: FT-SPR készülék sematikus ábrázolása (Kretschmann-elrendezés szerint) 1.b) ábra: Thermo Scientific FT-SPR készülék, SPRTM 100 modul (és a NicoletTM 6700 FT-IR Spektroszkóp) lására egyértelműen az általunk is használt módszer bizonyult a legnagyobb érzékenységűnek [4], Az eljárás segítségével különböző biomolekulák speciálisan kezelt biomimetikus felszínhez való kötődését is monitorozhatjuk [2, 15]. Emellett alkalmas specifikus antigénantitest-kötődések vizsgálatára [16], illetve különböző fehérjék funkcionalizált polimerfelszínnel való kölcsönhatásának nyomon követésére is [14, 18]. Jelen kutatásunk célja a formaldehid és a metakrilsav - mint gyakori fogászati allergének - FT-SPR chiphez történő kötődésének vizsgálata, illetve a molekulákkal végzett koncentrációfüggő mérések elemzése és kiértékelése. Anyag és módszer Kísérleteinket formaldehid és metakrilsav hígítási sorokkal végeztük. A Sigma-Aldrich Co. LLC. (St. Louis, MO, USA) által forgalmazott 37%-os töménységű formaldehid, illetve 99%-os töménységű metakrilsav-oldatokból 0,01 %-os, 0,05%-os, 0,1%-os, 0,15%-os és 0,2%-os koncentrációjú oldatokat készítettünk, oldószerként desztillált vizet használva. A mérések során a háttérspektrumokat desztillált víz segítségével vettük fel. Méréseinket szobahőmérsékleten végeztük a Thermo Electron Corporation által kifejlesztett (Waltham, MA, USA) SPRTM 100 modult használva, amelyet a Thermo Electron Corporation által gyártott (Waltham, MA, USA) NicoletTM 6700 FT-IR Spektroszkóppal kapcsoltunk rendszerbe. Fehér fényt kibocsátó wolfram-halogén fényforrást alkalmaztunk kalciumfluorid (CaF2) fényosztóval. A prizmához erősített aranyfilm vastagsága 45 nm volt. A chip felszínéhez egy folyadékcella volt rögzítve; a vizsgált minták szállítása Cole Palmer 110 típusú (EW-74905-04, Hollston, Ma, USA) fecskendő pumpa segítségével történt 0,5 ml/min sebességgel. Az általunk használt elrendezés elvi vázlata, és maga a berendezés az 1. ábra a.) és b.) részén kerül bemutatásra. A visszavert fénysugarat egy InGaAs detektorra fókuszáltuk. A kapott adatok feldolgozásához a Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, MA, USA) által kifejlesztett OMNICTM szoftvercsomagot használtuk. Minden egyes görbe 16 interferogram átlagolásának eredménye 8 cm'1-es felbontás mellett, az adatpontok távolsága 0,964 cm'1. Mindkét hígítási sorral végzett mérés során meghatároztuk a különböző töménységű oldatok egyéni spektrumait. Az egyéni spektrumok alapján meghatározott rezonanciahullámhossz-értékek segítségével az adott anyaghoz tartozó kalibrációs egyenes meghatározására került sor. Eredmények A 2. ábrán láthatók a formaldehid-oldatok FT-SPR egyéni spektrumai közös diagramon feltüntetve. Az egyes görbék balról jobbra haladva: desztillált víz,
