Szemészet, 2016 (153. évfolyam, 1-4. szám)

2016-12-01 / 4. szám

A szaruhártya vizsgálata konfokális mikroszkóppal

detileg a látóidegfő és retina vizsgálatára kifejlesztett Heidelbergretinatomográf 2 (HRT2) készüléket Guthoff és munkatársai egy jó minőségű mikroszkóp lencsével, Rostock Cornea Modullal (RCM) egészítették ki, ami lehetővé tette a szaruhártya vizsgálatát. A HRT2/RCM-dióda lézerfényforrást alkalmaz, amely 670 nm-es hullámhosszúságú lézersugarakat bocsájt ki. Ennek köszönhetően a felbontó képessége kiváló, és a beépített nagy sebességű léptetőmotor segítségével bemozdulás-mentes képet eredményez (10). Horizontális felbontása 1 fim, axiális 4 fim. A HRT2 továbbfejlesztése eredményeképpen jelent meg HRT3 szoftver, a HRT2 hiányosságainak kiküszöbölésére. A HRT3 kevésbé operátor-függő, bővített adatbázissal rendelkezik és nagyobb diagnosztikai pontosságot tesz lehetővé (12). Az LSCM nagy előnye, hogy a szaruhártya vizsgálatán kívül lehetővé válik bármilyen testfelszín - túl a limbus, kötőhártya, könnyfilm, ínhártya és szemhéjak vizsgálatán - bőr, orális nyálkahártya, nyelv felszínének tanulmányozása egyaránt (8). Hátránya viszont, hogy szemben a korábban említett TSCM- és SSCM-technikákkal, amikor vizsgálat során viszkózus gél kerül a szaruhártya és objektív lencse közé, az LSCM esetében a gél PMMA-műanyagból készült speciális vizsgálófejbe kerül - biztosítva a fix távolságot a cornea és mikroszkóp között - így az közvetlenül a szaruhártyával érintkezik. Ennek következtében a cornea lelapulhat, ami műtermékek kialakulásához vezethet (19), ám a készülékre szerelt laterálisán elhelyezkedő digitális kamera segíti követni a lencse szemfelszínen való helyzetét, miáltal a nyomásnélküli, korrekt mérést tesz lehetővé (8).

A mai legmodernebb IVCM horizontális felbontóképessége elérheti

1- 2 fim-t, axiális felbontóképessége

2- 10/яп-t (8,17), az adott mintáról akár 600-800-szoros nagyítást kapva (5).

Vizsgálati

MÓDSZER, ELJÁRÁS

A vizsgálat előkészületeként a páciens szemfelszíni oxibuprocain cseppérzéstelenítésben (0,4% Humacain, Teva Magyarország Zrt.) részesül. Az SSCM-mel történő vizsgálat esetén az objektív felszínére, míg HRT/RCM-készülékek alkalmazásakor a síkfelületű PMMA-műanyag TomoCap-be folyékony immerziós médiumot (Vidisic gél, Dr. Mann Pharma, Berlin, Németország) helyezünk. A beteg fejének stabilizálása után az objektívet manuális módon z-tengely mentén előre mozgatva, vagy automata z-scan funkció alkalmazásával megjelennek a szaruhártya rétegei. Az objektív axiális irányba való mozgatásával a cornea összes rétege láthatóvá válik (8). A vizsgálat során a gél (SSCM), illetve a speciális kupak (HRT/RCM) érintkezik a cornea felszínével. A vizsgálat kb. 2 percig tart, azonban azt a páciens kooperációja nagymértékben befolyásolja. A vizsgálat kivitelezéséhez szükséges a beteg mozdulatlan, fej-, illetve szemfixációja. A szaruhártyát megfigyelhetjük annak centrumában, valamint más tanulmányozni kívánt részein egyaránt. A rétegfelvételek SSCM esetében VHS-szalagra, míg HRT/ RCM-készülékek esetén digitális adathordozóra kerülnek. A felvételek értékelésénél kiválasztjuk a számunkra feldolgozni kívánt képeket. Sejtszámolást végezhetünk az adott képkockákból tetszőleges nagyságú részen Rol-keret segítségével („Region of Interest”), a terület pontos méretét kiszámítja a szoftver. ConfoScan esetén az így maximálisan vizsgálható terület 340x255 fim (10), HRT2/RCM esetében 250x250 fim, 400x400 fim, illetve 500x500 fim (8). A területen belüli sejtek manuális módon történő megjelölése után a készülék megadja a sejtdenzitás értéket mm2-re vonatkoztatva. Az endothelréteg esetében lehetőség van automatikus elemzésre egyaránt, a szoftver segítségével a sejtszámon kívül számos egyéb paramétert

kaphatunk meg (például átlagos sej tnagyság, sej tnagyság-eloszlás) (10, 11). A konfokális lézer mikroszkóp objektív részének állításával a szaruhártya rétegeinek mélységi felvételei készülnek. HRT/RCM- készülékek képesek 3D képalkotási módban 40 db, egymástól megközelítőleg 2 fim távolságonként felvenni a képsíkokat, amelynek eredményeképpen létrejön a 80 fim mélységű 3D kép. Emellett lehetőség nyílik 6 másodperc időtartamú szekvenciális felvételre és összesen 100 darab tárolására, változó másodpercenkénti képváltás (1-30 frames per second) mellett, így lehetséges dinamikus folyamatok, mint például véráramlások (2. a-b ábra) megfigyelése is (8).

AZ EGÉSZSÉGES SZARUHÁRTYARÉTEGEK JELLEMZŐI KONFOKÁLIS MIKROSZKÓPPAL A lézer-scanning konfokális mikroszkópok képfeldolgozási elve azon alapul, hogy az alkalmazott lézerfény a különböző fényszórási tulajdonságokkal rendelkező felületekről különböző mértékben verődik vissza. Ezáltal elkülöníthetóvé válnak olyan felületek, mint citoplazma vagy extracelluláris folyadék találkozása lipidben gazdag membránnal. Előbbiek alacsonyabb, míg a lipidben gazdag membránok - úgymint a sejtfal, a sejtmagmembrán és a mitokondriális membrán - magasabb reflexiós indexszel rendelkeznek. A visszaverődött fény mennyisége függ a határfelületek struktúrájától. A durva felületek jobban, míg a sima felszínűek kevésbé szórják a fénysugarakat, ezáltal a jobb visszaverő tulajdonsággal rendelkező elemek világosabb árnyalattal jelennek meg a leképzés folyamán (8). Az objektív axiális tengely mentén történő mozgatása által láthatjuk a cornea rétegeinek tipikus sejtes megjelenését.

Az epithelium felszínes rétegének sejtjei a legnagyobb méretűek a laphámréteg sejtjei között, alakjuk