Szemészet, 2013 (150. évfolyam, 1-4. szám)
2013 06-01 - Supplementum
щ 2013. június 22., szümbat/22 June 2013, Saturday Conclusion: Both lens types can correct the vision well and provide good comfort in the cases of severe keratoconus. The wearing comfort significantly reduced after 30 days in the H group. Piboflavin-UVA fotodinámiás inaktivacío (PDI) hatása humán keratocyta sejtkultúrák viabilitására, apoptosisára, aktivációjára, növekedési faktor és interleukin szekréciójára Szentmáry Nóra1 Л Jiong Wang1, Tanja Stachon1, Xufei Song1, Timo Eppig3, Achim Langenbucher3, Berthold Seitz1 ’Saarlandi Egyetem, Szemészeti Klinika, Homburg/Saar Németország, Semmelweis Egyetem, Szemészeti Klinika, Budapest, Magyarország, Saarlandi Egyetem, Kísérletes Szemészeti Intézet, Homburg/Saar Németország Célkitűzés: A riboflavin-UVA-crosslinking használatos a progresszív keratoconus kezelésére és mint „riboflavin-UVA fotodinámiás inaktiváció (PDI)” egy lehetséges új kezelési mód terápia rezisztens fertőzéses keratitisben. Célunk a riboflavin-UVA PDI hatásának meghatározása humán keratocyta sejtkultúrák viabilitására, apoptosisára, aktivációjára, növekedési faktor és interleukin szekréciójára volt. Módszer: A primer humán keratocyta kultúrákat kollagenázos emésztést követően (1 mg/ml) humán szaruhártyákból nyertük és 10% FCS-t tartalmazó DMBM/Ham’s kultúrmédiumban tenyésztettük. A keratocyta kultúrákat 0,05% és 0,1% koncentrációjú riboflavin expozíció alatt UVA fénnyel (370 nm) sugároztuk be 4,1 percen át (8,0 mW/cm2). Huszonnégy órával a kezelést követően a sejtek viabilitását Alamar blue assay, apoptosisát, CD34 és alpha-smooth muscle actm (alpha-SMA) expresszióját áramlásos cytometna (FACS), VEGF, FGFb, TGFß, KGF, HGF, IL-la, IL-ß, IL-6 és IL-8 szekrécióját „enzyme-linked immunosorbent assay” (ELISA) segítségével határoztuk meg. Eredmények: Csak riboflavin expozíciót illetve besugárzást követően a sejtek viabilitása, apoptosisa, alpha-SMA, CD34 növekedési faktor és interleukin expressziója nem változott szignifikánsan. Riboflavin-UVA-PDI után a keratocyták viabilitása szignifikánsan csökkent (P<0,01) 0,1 %, CD34 és alpha-SMA expressziója növekedett (P<0,1) 0.05 % riboflavin koncentráció alkalmazásakor a kontrollokhoz képest. Az apoptotikus keratocyták százalékos aránya a kontrollokhoz képest nem változott az alkalmazott riboflavin koncentrációk esetén PDI-t követően (p>0,09). Az IL-6 szekréció szignifikánsan növekedett a kontrollokhoz képest (p<0,0001), de a VEGF, FGFb, TGFß, KGF, HGF, IL-la, IL-ß, IL-8 expresszió változatlan maradt. Következtetések: A riboflavin-UVA fotodinámiás inaktiváció csökkenti a keratocyták viabilitását, fokozza a myofibroblasztos transzformációt, a multipotens haematopoietikus őssejtek aktivációját és az IL-6 szekréciót, de nem befolyásolja a keratocyták apoptosisát, valamint VEGF, FGFb, TGF , KGF, HGF, IL-la, IL-ß és IL-8 expresszióját sejtkultúrában. Kulcsszavak: UVA, humán keratocyták, riboflavin, viabilitás, apoptosis, alpha-SMA, CD34 Impact of riboflavin-UVA photodynamic inactivation (PDI) on viability, apoptosis, activation, growth factor and interleukin secretion of human keratocytes in vitro Nóra Szentmáry12, Jiong Wang1, Tanja Stachon1, Xufei Song1, Timo Eppig3, Achim Langenbucher3, Berthold Seitz1 'Department of Ophthalmology, Saarland University Medical Center Homburg/Saar Germany , department of Ophthalmology, Semmelweis University, Budapest, Hungary, "Experimental Ophthalmology, Saarland University, Homburg/Saar Germany Objective: Riboflavin-UVA-crosslinking is a treatment modality of progressive keratoconus and as "riboflavin-UVA photodynamic inactivation (PDI)" a potential new treatment alternative in therapy resistant infectious keratitis. Our purpose was to determine the impact of riboflavin-UVA-PDI on viability, apoptosis, activation, growth factor and interleukin secretion of human keratocytes, in vitro. Methods: Primary human keratocytes were isolated by digestion in collagenase (1.0 mg/ml) from human corneal buttons, and cultured in DMEM/Ham's F12 medium supplemented with 10 % FCS. Keratocyte cel! cultures underwent UVA light illumination (370 nm) for 4-Ю minutes (S.O mW/cm2) during exposure to 0.05% and 0.1% concentrations of the photosensitizer riboflavin. Twenty-four hours after treatment, cel! viability was evaluated by the Alamar blue assay, apoptosis, CD34 and alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) expression using flow cytometry (FACS) and VFCF, FGFb, TGFß, KGF, HGF, IF-1a, IL-ß, IL-6 and IL-8 secretion by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: Using riboflavin or UVA light only, we did not detect significant changes of cell viability, apoptosis, CD34 and alpha-SMA expression or secretion of growth factors and interleukins. Using riboflavin-UVA-PDI, viability of keratocytes decreased significantly at 0.1 % (P<0.01),.CD34 and alpha-SMA expression increased (P<0.01) at 0.05 % concentration of riboflavin compared to untreated controls. There was no significant change in the percentage of apoptotic keratocytes compared to controls at any of the used riboflavin concentrations following PDI (P>0.09). Secretion of IL-6 increased significantly compared to controls (P< 0.0001), however, VEGF, FGFb, TGFß, KGF, HGF, IL-1a, IL-ß, IL-8 expression remained unchanged. Conclusions: Riboflavin-UVA-photodynamic-inact ivat ion decreases viability, induces myofibroblastic transformation, multipotent haematopoietic stem cell transformation and IL-6 secretion. However, it does not have an impact on apoptosis and secretion of VEGF, FGFb, TGFß, KGF, HGF, IL-1a, IL-ß and IL-8 of human keratocytes, in vitro. Keywords: UVA, human keratocytes, riboflavin, viability, apoptosis, alpha-SMA, CD34 {89 ;\ /
