Szemészet, 2003 (140. évfolyam, 1-4. szám)

2003-12-01 / 4. szám

Szemészet

A HLA-tipizálás bevezetése és alkalmazása a Debreceni Szemklinikán

Tóth Enikő,1-2 Stenszky Valéria,2 Berta András,1 Módis László1

1Debreceni Egyetem, Szemészeti Klinika, Debrecen 2Debreceni Vérellátó Intézet

Célkitűzésünk az volt, hogy a Debreceni Szemklinikán bevezessük a donorok és recipiensek szöveti antigénjeinek vizsgálatát, azaz a HLA-tipizálást.

Módszerek: A HLA-A, -B, -C antigének meghatározását szerológiai módszerrel végeztük. A betegektől (n=27 fő) 20 ml perifériás vért vettünk (donorok esetén a meghatározás nyirokcsomóból történt). Lymphocytaszuszpenziót készítettünk, melyből I pl-t a Terasaki-féle tálca (Biotest ABC 72, INNO-TRAIN ABC 72) tipizáló savójához fecskendeztünk. Komplement hozzáadása és festés után a festett sejtek aránya megadta a pozitivitás mértékét. A HLA-DR antigéneket molekuláris biológiai, PCR DNS-SSP technikával határoztuk meg. A DNS izolálását 300 pl perifériás vérből végeztük (Gentra Capture Column Kit), melynek eredményeként 5-10 pg-nyi DNS-t kaptunk. A PCR reakciót (Biotest HLA-DRB SSP Kit) követően gélelektroforetikus futtatás után láthatóvá vált specifikus csíkok az adott antigének jelenlétét bizonyították.

Eredmények: 2002 októbere óta 10 multiorganikus donáció (átlagéletkor 40±9,8 év) során 20 szaruhártyát távolítottunk el in situ corneoscleralis excisióval. A donorok szerológiai szűrése után (HIV, HbsAg, CMV, JC) követően meghatároztuk az МНС I., II. osztályába tartozó antigének típusait.

A vizsgált 27 betegből 11 ismert antigenitású, 7 beteg random módon kiválasztott transzplantátumot kapott, míg 9 beteg még a várólistán szerepel.

Következtetések: Bevezettük és alkalmazzuk a HLA-tipizálás szerológiai és genetikai módszereit a keratoplasztikára váró betegek és donorok esetében. Tizenegy tipizált beteg ismert antigenitású transzplantátumot kapott. Az esetlegesen szükségessé váló következő átültetés során a beteg ilyen szöveti antigenitású corneát már nem kaphat, s ezzel megakadályozhatjuk a hiperakut rejekció kialakulását. Továbbá a HLA-egyezés javíthatja a magas rizikócsoportba tartozó graftok túlélését.

Procedures for HLA tissue-typing used in the Debrecen Eye Clinic

Tóth E.,1-2 Stenszky V.,2 Berta A.,1 Módis L.1

' University of Debrecen, Department of Ophthalmology 2Blood Bank Institute, Debrecen

Aim: To report details of the examination of tissue antigens (HLA typing) of donors and recipients used in our university Ophthalmology Clinic.

Methods: The HLA-A, B, and C antigens were determined by the serological method. We took a 20 ml peripheral blood sample from each patient (n=27). In the cases of donors, after serological screening tests (HIV, HbsAg, CMV, CJD), the HLA determination was made from samples from lymphatic nodes. In-situ corneoscleral excision was used from 10 multiorgan donors (mean age 40±9.8 years). We typed antigens of MHC classes I and II. We prepared a lymphocyte suspension, and 1 pi was injected to the typing serum on a Terasaki plate (Biotest ABC 72, INNO-TRAIN ABC 72). After adding complement and painting we determined the ratio of the painted cells and judged the positivity. We determined the HLADR antigens by a molecular-biology technique using the PCR DNA SSP Kit. We isolated the DNA from 300 pi of peripheral blood (Gentra Capture Column Kit), and obtained 5-10 pg DNA. After the PCR reaction (Biotest HLA-DRB SSP Kit) and electrophoresis, the presence of the particular HLA antigens was shown by the specific bands.

Result: Since October 2002 we have removed 20 corneas from donors. Eleven of the 27 HLA-typed patients received matched grafts, 7 received transplants which were not matched, and the remaining 9 patients are still on the waiting list.

Conclusions: We have introduced and applied HLA typing with serologic and genetic methods for donors and recipients waiting for keratoplasty. HLA matching can improve graft survival in high-risk cases. To prevent the occurrence of hyperacute rejection, it is important that patients should not receive a cornea with the same tissue antigens during the next possible transplantation.

2003 augusztus 28. - Refraktív sebészet / 2H Avgust 2003 - Refractive surgery