Szemészet, 1980 (117. évfolyam, 1-4. szám)
1980-08-01 / 3. szám
Szemészet 117. 154—157. 1!>80. A Szegedi Orvostudományi Egyetem Szemklinikái áriak (igazgató : Kakán Ágost egyetemi tanár) és Biokémiai Intézetének (igazgató : Guba Ferenc egyetemi tanár) közleménye Lipid vizsgálatok öregkori szürkehályogos lencséken I. A szolubilis, urea szolubilis és urea inszolubilis protein foszfolipoid és koleszterin tartalmának vizsgálata Í'ACSKÓ ANDREA, ÉDES ISTVÁN és SZIKLAI ISTVÁN A humán lencsefehérjéknek három fő csoportját különböztetjük meg: a szolubilis, urea szolubilis és urea inszolubilis protein frakciókat. Kialakulásuk úgy magyarázható, hogy a szolubilis krisztallinokból poszttranszlációs elváltozások révén először urea szolubilis, majd urea inszolubilis proteinek jönnek létre [13, 14, 15, 16]. Az urea inszolubilis protein frakció az életkor ^előrehaladásával, valamint az öregkori szürkehályog kialakulásával fokozatosan felszaporodik [3]. Az irodalmi adatok szerint [2, 8] ez a frakció főleg a lencserostok membránfehérjéit tartalmazza. A membránfehérjék mennyiségének fokozódása a kataraktogenezis során feltehetően úgy jön létre, hogy a poszttranszlációsan módosult krisztallin polipeptidláncok kapcsolata a lencserostok plazmamembránjával szorosabbá válik [2]. Erre vonatkozóan kerestünk mi is további adatokat, ezért megvizsgáltuk a különböző oldékonyságú frakciók lipid összetételét. Anyag és módszer A katarakta műtétek során eltávolított humán lencséket a SZOTE Szemklinikán gyűjtöttük és — 25 °C-on tároltuk. A lencsék a Pirié [II] féle beosztás szerint a II., III. stádiumnak feleltek meg. A lencsefehérjék kivonását Truscott és Augusteyn [19] szerint végeztük három lépésben. Először a szolubilis fehérjéket, majd az urea szolubilis fehérjéket vontuk ki. Az egyes frakciók kivonását addig folytattuk, míg lencsénként kevesebb mint 0,3 mg protein volt egy extraktumban. A nem oldódó fehérje maradékot tekintettük urea inszolubilis proteinnek. A kinyert frakciókat desztillált vízzel szemben dializáltuk, majd liofilizáltuk. A lipidek extrahálása Földi és mtsai [4] szerint történt. Az össz-foszfolipoid meghatározásához az extrahált lipid törzsoldat ismert mennyiségét Kieselgél-G (Merck) vékonyréteg kromatográfiás lapra vittük. A lapokat 50%-os kénsavval 180 °C-on hamvasztottuk, majd a képződött szervetlen foszfátot Kahovcova és Odavic szerint [6] meghatároztuk. Az egyes foszfolipoid frakciók szétválasztása két dimenziós vékonyréteg kromatográfia segítségével történt [12]. A lapokat 50%-os kénsavval hamvasztottuk, majd azonosítás után az egyes komponenseket lekapartuk és meghatároztuk szervetlen foszfát tartalmukat [6]. A komponensek azonosítása lipid standardok segítségével történt. Az össz-koleszterin meghatározásokat Glich [5] módszerével végeztük. Eredmények A humán kataraktás lencsék fehérje frakcióinak koleszterin- és össz-foszfolipoid tartalmát az I. táblázatban foglaltuk össze. Szembetűnő, hogy a koleszterin és össz-foszfolipoidok mintegy 60%-a az urea szolubilis frakcióban található. Sokkal alacsonyabb a szoulbilis frakció lipidtartalma. A koleszterin/össz-foszfolipoid hányados értéke valamennyi fehérjefrakcióban magas, ami az irodalmi adatok szerint [1, 7] jellemző az előrehaladott öregkori szürkehályogos esetekre. 154
