203919. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai készítmény vesekövek összetételének vizsgálatára
1 HU 203 919 A 2 A találmány vesekövek összetételének vizsgálatára alkalmas, új diagnosztikai készítményre vonatkozik. A találmány szerinti diagnosztikai készítmény a vesekőalkotók közül a 2,8-dihidroxi-adenin, az L-cisztin, a tercier kalcium-foszfátok, a kalcium-oxalát-mono- és -dihidrát (whewellit, weddelit) és a struvit kimutatására alkalmas; a készítmény alkalmazásakor a felsorolt kőalkotók egymás mellett is jól megkülönböztethetően és diagnosztikailag értékelhetően kimutathatók. A találmány szerinti készítmény legfontosabb előnye, hogy lehetővé teszi a 2,8-dihidioxi-adenin egyszerű és megbízható kimutatását más kőalkotók, köztük a 2,8-dihidroxi-adenin kimutatását egyébként nagymértékben zavaró húgysav mellett is. Az adenin-foszforibozil-transzferáz (APRT) enzim veleszületett, örökölhető hiánya miatt az adenin - adenilsav - inozin - húgysav folyamat első lépése blokkolt, így az élő szervezetben az adenin nem tud adenozin-5-foszfáttá alakulni. A felgyülemlő adeninből xantin-oxidáz enzim hatására 8-hidroxi-adeninen keresztül 2,8-dihidroxi-adenin (DHA) képződik, ami igen roszszul oldódó vegyület A DHA jelenlétére mintegy 15 éve figyeltek fel a kutatók (Cartier P., Hamet M. és Hambuiger J.: Compt Rend de Acad. Sei. France 279, 883 [1974]; Written F. R. és munkatársai: J. Ural. 130, 938 [1983]). A 2,8-dihidroxi-adenin a húgyutakban kikristályosodva már kisgyermekkorban köveket alkothat, de homokürítés szinte a születéstől kezdve lehetséges, aminek súlyos következményei lehetnek (pl. veseelégtelenség). A betegség kezelése a biztos diagnózis alapján (pl megbízható kőanalizis után) lehetséges: a xantinoxidáz bénítására a betegek allopurinolt kapnak és purinszegény diétát tartanak. így a betegség prognózisa jó. Kevés biztos esetet ismerünk; a betegség becsült gyakorisága 1:200 000. A tényleges gyakoriság azonban ennél jóval nagyobb, ugyanis a 2,6-dihidroxi-adenin kőalkotó felismerését megnehezíti az a tény, hogy kémiai reakciói nagyon hasonlítanak a húgysavéihoz, és sem a húgysav, sem a DHA nem ad röntgenámyékot A DHA éppúgy murexidpozitív, mint a húgysav, és a foszfor-molibdáttal végzett húgysav-meghatározáskor a DHA is reagál. Szakirodalmi adatok szerint (Stephens A. D.: Inherited metabolic stone disease - Whitfield H. N. és Hendry W. F. [szerk.]: Textbook of Genito-Urinary Surgery 628. oldal (Churcil Livingstone, Edinburgh, 1985); Simmonds H. A. és munkatársai: 2,8-Dihydroxy-adeninuria or when is a Uric Acid Stone not a Uric Acid Stone - Smith L. H„ Robertson W. G., Finlayson B. [szerk.]: Urolithiasis 125. oldal [Plenum Press, New York, 1981]) a 2,8-dihidroxi-adenin kövek a húgysavkövektől a gyakorlatban alkalmazott módszerekkel, így kolorimetriás módszerekkel, termogravimetriás analízissel vagy murexid teszttel nem különböztethetők meg megbízhatóan. A biztos azonosítás csak infravörös vagy tömegspektrofotometriás analízissel biztosítható, ezek a módszerek azonban nem mindig hozzáférhetőek. A legújabb irodalomban (Eur. Urol. 14,493 [1988]) Jung a nagynyomású folyadékkromatográfiát javasolja a DHA-kő analízisére, de ez is költséges és bonyolult módszer. A jelenleg forgalomban lévő, vesekövek elemzésére alkalmas diagnosztikai készítmények közül csak a Harzalith B reagens alkalmas a 2,8-dihidroxi-adenin kimutatására. Ez a reagens vizes oldatban kálium-bidroxidot, kálium-bromidot és higany(II)-jodidot (nem diszszociáló komplex) tartalmaz. A Harzalith B reagenssel reagáló kőalkotók közül a húgysav barna foltot ad, amiben precipitátum található lényegében egyenletes eloszlásban, míg a 2,8-dihidroxi-adenin olyan barna foltot képez, aminek a közepén dúsul fel a precipitátum. Minthogy a két mikroszkópos kép nagyon hasonló, a húgysav és a 2,8-dihidroxi-adenin biztonságos megkülönböztetéséhez igen nagy gyakorlat szükséges. Ha a húgysav nagy mennyiségben van jelen, vagy a minta szerves szennyezést (pl. vért) is tartalmaz, a húgysav és a 2,8-dihidroxi-adenin mikroszkópos képe lényegében nem különböztethető meg egymástól. A találmány olyan diagnosztikai készítményre vonatkozik, amellyel több vesekőalkotó - azaz a 2,8-dihidroxi-adenin, az L-cisztin, a tercier kalcium-foszfátok, a kalcium-oxalát-mono- és -dihidrát és a struvit egymás mellett is jól megkülönböztethetően és diagnosztikailag értékelhetően kimutathatók, és amely húgysav jelenlétében is lehetővé teszi a 2,8-dihidroxiadenin megbízható kimutatását. A találmány szerinti diagnosztikai készítmény higanyvegyületet és olyan erős sav vizes oldatát tartalmazza, amelyben a higanyvegyület Hg2+ vagy Hg+ ionokra disszociálva oldódik, adott esetben segédanyagokkal együtt. A találmány szerinti diagnosztikai készítmény erősen savas közegében a 2,8-dihidroxi-adenin feloldódik, de a jelen lévő Hg2+ vagy Hg+ ionokkal kicsapható. A húgysav a találmány szerinti diagnosztikai készítménnyel nem ad mikroszkópos vizsgálattal érzékeltethető reakciót. Ugyancsak nem reagál a nátrium- és ammónium-hidrogén-urát és a xantin (az utóbbi a szükségesnél tízszer nagyobb tömegű minta esetén enyhén, de nem zavaró módon reagálhat). A találmány szerinti diagnosztikai készítménnyel az L-cisztin, a tercier kalcium-foszfátok, a kalcium-oxalát-mono- és -dihidrát és a struvit is reagál a 2,8-dihidroxi-adeninen kívül; a felsorolt kőalkotók mindegyike jellegzetes, egymástól eltérő és könnyen megkülönböztethető mikroszkópos képet ad. A találmány szerinti diagnosztikai készítmény csak olyan erős savat tartalmazhat, amelyben a higanyvegyület Hg2+ vagy Hg+ ionokra disszociálva oldódik. Erős savakként nem használhatunk hidrogén-halogenideket, mert ezek a higanyvegyületekkel nehezen oldódó, illetve rosszul disszociáíó higany-halogenideket képeznek. Erős savként különösen előnyösen használhatjuk a nem illékony kénsavat. Kívánt esetben a diagnosztikai készítményhez egy vagy több segédanyagot, éspedig alacsony tenziójú szerves oldószert, felületaktív anyagot és/vagy színezéket is adhatunk. Az alacsony tenziójú szerves oldószer szerepe a rea-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
