203873. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített alkánkarbonsavamidok és származékaik és az e vagyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 873 B 2 A (ccc) lépés szerint a (LIV) általános képletű vegyületet fölös mennyiségű ásványi savval vízben és adott esetben segédoldószerben (pl. kis szénatomszámú alkanolban), szobahőmérséklet és 100 *C közötti hőmérsékleten reagáltatjuk vagy valamely erős bázissal, víz és adott esetben segédoldószer (pl. kis szénatomszámú alkanol) jelenlétében, 60-100 °C-os hőmérsékleten kezeljük, fly módon a megfelelő (Vd) általános képiétű vegyületet nyerjük. A XVII. reakciósémában Hét, A’, R6 és R15 jelentése a fent megadott és R5, kis szénatomszámú alkilcsoportot képvisel. A XVII. reakciőséma (ddd) lépése szerint egy (XLIa) általános képletű alkoholt valamely (XLVI) általános képletű nitrillel reagáltatunk, ásványi sav (pl. kénsav) és víz jelenlétében, -20 'C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten. A megfelelő (XLVIIa) általános képletű vegyületet kapjuk. A (w) lépés a XV. reakcióséma (tt) lépésével azonos. A XVIII. reakciósémában Hét, A, R4, R5 és R6 jelentése a fent megadott és R17 jelentése királis csoport, pl. nyíltláncú kis szénatomszámú alkilcsoport vagy egy vagy két hidroxil-, kis szénatomszámú alkoxi-, kis szénatomszámú alkilkarbonil-oxi-, trifluormetil- vagy arilcsoporttal helyettesített kis szénatomszámú alkilcsoport. A XVIII. reakcióséma (eee) lépése szerint egy királis (V) általános képletű vegyületet enantiomeijeire választunk szét. A rezolválás során a peptid-kapcsolás önmagukban ismert módszereivel királis, enantiomeriálisan tiszta savak amidjaivá alakítjuk. így pl. az (V) általános képletű királis amint enantiomeriálisan tiszta királis savval [pl. (R)-mandulasavval] ragáltatjuk, megfelelő kapcsoló ágens (pl. diciklohexilkarbodiimid) és promoter (pl. 1-hidroxi-benzotriazol) jelenlétében, poláros aprotikus oldószerben (pl. dimetil-formamidban). Ekkor a megfelelő (LV) általános képletű amidot kapjuk. Az (LV) általános képletű amidot ffakcionátl kristályosítással, kromatográfiás úton stb. választhatjuk szét a tiszta diasztereomerekre. Az (fff) lépés során az enantiomeriálisan tiszta (V) általános képletű vegyületet a diasztereomeriálisan tiszta (LV) általános képletű amid hidrolízisével állíthatjuk elő. A hidrolízist pl. vizes ásványi savval 60- 120 “C-os hőmérsékleten hajtjuk végre. Az (I) általános képletű vegyületek szervetlen vagy szerves savakkal savaddíciós sókat képeznek. A sóképzéshez gyógyászatiig alkalmas szervetlen savak (pl. hidrogén-halogenidek, mint pl. sósav, bróm-hidrogénsav, jód-hidrogénsav; más ásványi savak, pl. kénsav, salétromsav, foszforsav, perklórsav stb.), alkil- és monoarilszulfonsavak (pl. etánszulfonsav, p-toluolszulfonsav, benzolszulfonsav stb.), más szerves savak (pl. borkősav, maleinsav, citromsav, szalicilsav, aszkorbinsav stb.) alkalmazhatók. Az (I) általános képlet vegyületek gyógyászati szempontból nem-alkalmas savaddíciós sóit gyógyászatiig alkalmas savaddíciós sókká alakítjuk oly módon, hogy a gyógyászati szempontból nem-alkalmas aniont gyógyászatiig alkalmas anionra cseréljük le. Eljárhatunk oly módon is, hogy a gyógyászati szempontból nem-alkalmas sót semlegesítjük, majd az ily módon kapott szabad bázist gyógyászatiig alkalmas savaddíciós sóvá alakítjuk. Az (I) általános képletű vegyületek vérlemezkeaktiváló faktor (PAF) antagonisták és ezért a vérlemezkeaktiváló faktor fokozott működésével összefüggő különböző betegségek, valamint kardiovaszkuláris (keringési) betegségek, tüdőbetegségek, immunológii rendellenességek, gyulladásos betegségek, dermatológiai rendellenességek, sokkok vagy transzplantációs kilökődések kezelésére alkalmazhatók. Az (I) általános képletű vegyületek aktivitását az alábbi tesztekkel igazoljuk: Kötődési teszt a) Meghatározás A kötődés meghatározását 50 pl olajkeveréket [2 rész Siliconol AR200 (Serva) és 1 rész Silicone Fluid (Arthur H. Thomas) keveréke] tartalmazó 400 pl-es polietilén mikrocentrifuga csöveken (Beckman) végezzük el. A csövekhez puffert, standardot vagy analógokat (össztérfogat 150 pl) adunk. A csövekhez ezután radioaktivan jelzett 3H-PAF-t (50 pl) adunk. A reakciót 50 pl kutyavérlemezke (2xl07 lemezke) hozzá-1 adásával megindítjuk. A csöveket lezárjuk, keveredés céljából többször megfordítjuk, majd szobahőmérsékleten 10 percen át inkubáljuk. A véárlemezkéket az inkubációs keveréktől Beckman Microfuge B centrifugában végzett egy perces centrifugálással elválasztjuk. A csövek csúcsát levágjuk, a vérlemezkéket a csúcsokból 200 pl 50%-os metanollal (Burdick and Jackson) kimossuk. Ezután aquasolt (NEN, 10 ml) adunk hozzá és a mintákban a radioaktivitást Techtran szalagrögzítőhöz kapcsolt LS 8100 Bechman-féle folyadék szcintiliciós számlálóval meghatározzuk az adatokat „in house computer” rendszeren keresztül dolgozzuk fel. Alternatív módon a radioaktivitást Iso-Data mikroprocesszorhoz kapcsolt Searle Mark III. folyadék szcintillációs számlálóval határozzuk meg. Az eredményeket az I. táblázatban közöljük. b) Vérlemezkék elkészítése A vért érzéstelenített vagy nem-érzéstelenített kutyákból, antikoagulánsként 3,8% nátrium-citrátot [1 térfogat citrát/9 térfogat vér] tartalmazó 50 ml-es műanyag centrifugacsövekben gyűjtjük össze. A vörös vérsejteket szobahőmérsékleten percenkénti 600 fordulat mellett (100-125 g) 15 percen át végzett centrifugálással eltávolítjuk. A felülúszó, vérlemezkékben dús plazma (PRP) aliquot részletét sejtszámlálás céljaira félretesszük és a maradék részt 0,15 mólos citromsavval pH 6,5 értékre savanyítjuk. A vérlemezkepelletet szobahőmérsékleten percenkénti 2000 fordulat (1000 g) mellett végzett centrifugálással kapjuk. A mosott pelleteket oly módon készítjük el, hogy a vérlemezke-pelletet 1 millimól etiléndiamin-tetraecetsavat tartalmazó PBS-ben egyszer újraszuszpendáljuk, majd a vérlemezkéket 0,1%-os BSA/PBS-ben újraszuszpendáljuk. A mosostt vérlemezkék aliquot részletét megszámláljuk. A kötődés meghatározásához felhasznált vérlemezkéket 2xl07 vérlemezke/kémcső [4xl08 vérlemezke/ml] értékre hígítjuk. A vérlemez-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
