203840. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nativ inzulint és bázisosan módosított inzulint tartalmazó elegykristályok szuszpenziójának és elegykristályoknak, valamint ezeket tartalmazó injektálható készítményeknek az előállítására
1 HU 203 840 B 2 kristályok többé-kevésbé gyorsan kiválnak az oldatból. A fenti módon kapott elegykristályok a felettük álló oldattal együtt közvetlenül is felhasználhatók gyógyszerkészítményként. Ha az oldathoz (megfelelő vegyültek alakjában cink-ionokat adunk a depó-hatás elősegítésére, akkor ezek mennyiségét előnyösen úgy választjuk meg, hogy a kapott elegykristály-szuszpenzió 100 pg/100 NE. Zn-iont tartalmazzon. Az Uyen készítmények egy változataként a fenti módon előállított elegykristályok centrifugálással elkülöníthetők, majd fagyasztószárítás után valamely placebo-pufferoldatban megfelelő adagban újból szuszpendálhatók. A találmány szerinti elegykristályok, valamint az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények a közepes mértékű retard-profiljuk folytán lehetőséget nyújtanak a diabetes mellitus gyógykezelése során a hatás finom beállítására, a B komponensként alkalmazott vegyületek fajtájának és mennyiségének változtatása útján, ami a gyógykezelés szempontjából lényeges előnyt jelent. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa 25% humán-inzulinból és 75% Arg2-(B31-32)-humán-inzulinból álló elegykristályok 40 N-E./ml összaktivitású szuszpenziója 100 ml össztérfogatú vizes oldatot készítünk az alábbi anyagokból: Arg2-(B31-32)-humán-inzulin (27 N.E./mg) 111 mg humán-inzulin (27 NE./mg) 37 mg citromsav-1-hidrát 1050 mg glicerin 1600 mg fenol 65 mg m-krezol 165 mg A fenti oldat pH-értéke kb. 3,5. Az oldatot a kristályosítás megindítása céljából n nátrium-hidroxid-oldattal 6,3 pH-értékre állítjuk be. A kritályosodás teljes végbemenetelére az oldatot szobahőmérsékleten éjjelen át állni hagyjuk. Ezután a kristályok feletti oldatban nagynyomású folyadék kromatográfiai elemzéssel 3-5 t% humán-inzulin (Arg2-(B31-32)-humán-inzulin mutatható ki. E két komponens mennyiségi aránya egyezik az elegykristályokban fennálló 25/751% aránnyal. Ha a fenti szupematáns oldatból 100 pl mennyiséget nyúlnak szubkután beadunk, szignifikáns vércukorszint-csökkenés nem mutatkozik (minthogy az oldat gyakorlatilag már nem tartalmaz hatóanyagot). 2. példa Az 1. példában leírthoz hasonló módon elegykristályokat állítunk elő az alábbi anyagok felhasználásával: Arg2-(B31-32)-humán-inzulin 74 mg Arg-B31 -humán-inzulin 37 mg humán-inzulin 37 mg (a segédanyagok az 1. példa szerint; a vizes oldat össztérfogata 100 ml.) A kristályosítás befejezése után a levált kristályokat centrifugálással elkülönítjük, pufferoldattal mossuk és fagyasztva szárítjuk. Az így kapott elegykristály-port 6,5 pH-értékű placebo-pufferoldatban, 40 N.E.Anl koncentrációban szuszpendáljuk. 3. példa A 2. példában leírt módon elegykristályokat állítunk elő az alábbi hatóanyagokból: humán-inzulin (27 N.E./mg) 37 mg Arg-B31 -humán-inzulin (27 N.E./mg) 111 mg A kapott kristályokat centrifugálással elkülönítjük és fagyasztva szárítjuk. Az így kapott kristálypor 6,3 pH-értékű placebo-pufferoldattal40 NE Tmg koncentrációban készített szuszpenziója kutyán, 0/2 NE/kg szubkután adagban, határozottan elnyújtott vércukorcsökkentő hatást mutat, amely lényegileg egyezik az NPH-inzulinéval. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás elegykristályok szuszpenziójában és elegykristályoknak az előállítására A) natív inzulinból, dez-Phe-Bl-inzulinból, dez-Thr- B30-(humán)- vagy dez-Ala-B30(sertés, marha)inzulinból, amelyek izoelektromos pontja legfeljebb 5,5, és B) legalább egyféle, a B-lánc C-terminális végén bázisosan módosított, 5,8 és 8,5 közötti izoelektromos pontú inzulinból, azzal jellemezve, hogy vizes oldatot készítünk A) legfeljebb 5,5 izoelektromos pontú natív inzulinból, dez-Phe-Bl-inzulinból, dez-Thr-B30(humán)- vagy dez-Ala-B30(sertés, marha)-inzulinból és B) legalább egyféle, a B-lánc C-terminális végén bázisosan módosított, 5,8 és 8,5 közötti izoelektromos pontú inzulinból, mimellett az említett A és B komponenst (15— 85):(35—65) tömegarányban és az A és B komponenst (27 NE/mg aktivitású inzulinokra számítva) 05-5,0 mg/ml összkoncentrációban alkalmazzuk; továbbá az oldatban- legalább egyféle, fiziológiailag elviselhető tartósítószert,- legalább egyfajta fiziológiailag elviselhető, az oldatot izotóniássá tevő szert,- legalább egyfajta fiziológiailag elviselhető savat is oldunk; az oldat pH-értékét 2,5 és 3,5 közöttire állítjuk be, majd valamely fiziológiailag elviselhető bázis és adott esetben valamely fiziológiailag elviselhető puffer hozzáadásával az oldatot 55 és 6,9 közötti, előnyösen 5,9 és 65 közötti pH-értékre állítj uk be; azután az oldatból az A és B komponenst tartalmazó elegykristályokat kikristályosítjuk, és kívánt esetben a kritályokat a kristályosítási közegből elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kristályosítást 5,9 és 6,5 közötti pH-értéknél végezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
