203755. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklopentenil-purin-származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 755 B 2 (1 S,4R)-4-(2,6-diamino-9H-purin-9-il)-2-ciklopentén-karbinol Jeges hűtés és keverés közben 210 mg 8. köztitermék 10 ml víz és 50 ml tetrahidrofurán elegyével készült oldatához hozzáadunk 237 mg alumínium hói és 0,5 %-os vizes higany(II)-klorid-oldatból készített alumínium-amalgámot kis adagokban 15 perc leforgása alatt. 40 perc elteltével a kevert reakciőelegyet szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk, majd 15 óra elteltével a reakciőelegyet szilikagélen (Kieselguhr) átszűrjük az oldhatatlan rész eltávolítása céljából. A szúrőlepényt víz és tetrahidrofurán 1:5 térfogatarányú ekgyéből 60 ml-rel átmossuk, majd az egyesített szűrleteket bepároljuk. A maradékot 10 g „Merck 9385” márkanevű szilikagélen oszlopkromatográfiás tisztításnak vetjük alá, eluálószerként kloroform és etanol elegyeit használva. így 159 mg mennyiségben hab formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk. [a]i>—81* (c-1,04 %, metanol) (6-os pH-jú puffer) 255,0 nm (Ejí, 302), 280,8 nm (El*, 381) 'H-NMR (DMSO-d«): 7,61 (1H), 6,66 (2H), 6,10 (1H), 5,87 (1H), 5,76 (2H), 5,38 (1H), 4,76 (1H), 3,45 (2H), 2,87 (1H), 2,60 (1H), 1,60 (1H). 13. példa (1S,4R )-4-(2-Amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2- -ciklopentenil-karbinol - (rR,4’S)-2-amino-l,9- -dihidro-9-[4-(hidroxi-metil)-2- ciklopentén-141]-6H-purin-6-on 144 mg 12. példa szerinti vegyület 10 ml 0,1 mólos, 6-os pH-jú pufferrel (28,4 g dinátrium-ortofoszfátból állítjuk elő 2 liter vízben, majd a pH-t ortofoszforsavval állítjuk be) készült, zavaros oldatához hozzáadjuk 0,5 ml (778 egység) adenozin-dezamináz kálium-foszfátra nézve 0,01 mólos 50 %-os glicerinoldattal (pH-6,0) készült oldatát, majd az így kapott reakcióelegyet 37 *C-on keverjük. 18,5 óra elteltével a kapott szuszpenziót hűtőszekrényben lehűtjük, majd a kivált csapadékot vízből átkristályosítjuk. így 86 mg mennyiségben fehér csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk. [<x]d—49° (c-0,5 %, dimetil-szulfoxid) (6-os pH-jú puffer) 252,6 nm (Eli* 531) 'H-NMR (DMSO-d«): 10,60 (1H), 7,60 (1H), 6,47 (2H), 6,10 (1H), 5,86 (1H), 5,33 (1H), 4,72 (1H), 3,45 (2H), 2,59 (1H), 1,58 (1H). 14. példa (lalfa,4alfa)-4-(2-Amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2- ciklopentenil-karbinol enantiomerjeinek előállítása (a) (lS,4R)-4-(2-amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2- -ciklopentenil-karbinol 50 *C-on 100 mg 11. példa szerinti diaminoszármazékot feloldunk 3 ml 0,05 mólos, 7,4 pH-jú dikáliumhidrogén-foszfát-pufiferben. A kapott oldatot szobahőmérsékletre lehűtjük, majd hozzáadunk 40 egység adenozin-dezaminázt (a Sigma cég által VI. típusként szállított, borjú intesztinális mikózájából kivont). Szobahőmérsékleten 3 napon át végzett inkubálást követően a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük. Hozama 18,2 mg. A szűrletet 14 ml-re betöményítjük, majd a koncentrátumot 2 napon át hűtőszekrényben tároljuk. A további mennyiségű kivált anyagot szűréssel elkülönítjük, mennyisége 26,8 mg. A kétféle szilárd anyagot vízből átkristályosítjuk, amikor a lépés 269-272 "C olvadáspontú tiszta címadó vegyületét kapjuk. [a] B*—62,1* (c-0,3 %, MeOH). (b) (lR,4S)-4-(2-amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2- -ciklopentenil-karbinol Az előző lépésben az lS,4R-izomer előállításánál képződött szőrieteket összeöntjük, majd szárazra pároljuk. A reagálatlan kiindulási diaminoszármazékot szilikagélen flash-kromatografálással különítjük el, eluálószerként 10 térfogat% metanolt tartalmazó kloroformot használva. A diaminoszármazékot ezután feloldjuk 15 ml 0,05 mólos, 7,4 pH-jú dikálium-hidrogén-foszfát-pufiferben, majd az oldathoz 800 egység adenozin-dezaminázt adunk. Az oldatot ezután 37 *C-on 96 órán át inkubáljuk. Az ekkor elvégzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat kis menynyiségű reagálatlan kiindulási anyagot mutat ki. Az oldatot forrásban lévő vízzel elegyítjük, majd 3 percen át forraljuk és ezt követően szűrjük a denaturálódott fehérje eltávolítása céljából. Ezután további 800 egység adenozindezaminázt adagolunk, majd a műveletsort megismételjük. A fehérjétől mentesített oldatot végül szárazra pároljuk, majd a kapott maradékot vízből kristályosítjuk. így a vízből szűréssel a cím szerinti vegyület különíthető el 265-270 "C olvadáspontú fehér csapadékként. [a]i,4-+61,r (c-0,3 %, MeOH). 15. példa (±)-(lalfa,4alfa)-4-(2-Amino-6-hidroxi-9H-purin-9--il)-2-ciklopentenil-acetoxi-karbinol 130 mg (040 mmól) 10. példa szerinti vegyület és 5 mg (0,04 mmól) 4-(dimetil-amino)-piridin 6 ml acetonitril és 0,09 ml (0,66 mmól) trietíl-amin elegyével készült szuszpenziójához hozzáadunk 0,06 ml (0,6 mmól) ecetsavanhidridet, majd az így kapott reakciőelegyet szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyhez 1 ml metanolt adagolunk, majd az így kapott elegyet betöményítjük és 2,0*12 cm méretű oszlopba töltött 14 g szilikagéllel abszorbeáltjuk. Kloroform és metanol 20:1 térfogatarányú elegyével végzett eluálás után a terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtők, majd bepároljuk. A kapott fehér csapadékot metanol és etil-acetát elegyével mossuk. így 123 mg (85 %) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelyet metanollal további tisztításnak vetünk alá. Ekkor 237-239 *C olvadáspontú tűkristályokat kapunk. Elemzési eredmények (C13H15N5O3) C, H, N. 16. példa (lS,4R)-4-(2-Amino-9H-purin-9-il)-2-ciklopentenil-karbinol 1,202 g, a 12. példa 8. köztitermékeként említett (lS,4R)-4-[2-amino-6-(metoxi-amino)-9H-purin-9-il]-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 11
