203732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új azolszármazékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 732 B 2 nél 48, dermaphytonoknál 72 óra A kapott eredményeket az 1. és 2. táblázatban foglaltuk össze. 1. táblázat Az 1. példa szerinti vegyiilet gombaellenes hatása (MIC) in vitro MIC-érték* (mg/ml) gomba csoport módszer agar-hígítás mélykultúra (felületi merített tenyészet) tenyészet) Dermatophy tonok* * 0,4-3,1-Sarjadzó gombák**» 0,4-200 1-100 Penészgombák**** 3,1-25-*A mikroorganizmus szaporodásának meggátlásához szükséges a legkisebb koncentráció ♦•Epidermophyton floccosum, Trichophyton mentagrophytes, Microsporum gypseum; •»♦Candida albicans, Candida tropicalis, Cryptococcus neoformants, Torulopsis glabrata, Trichosporon ♦♦•♦Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger 2. táblázat Az 1. példa szerinti vegyület hatása különféle gombákra „szubmic”* koncentrációban módszer gombafej eredmény telepátmérő Trichophyton ED50=0,78-0,96 métamg/1 mértének grophytes vizsgálata** Aspergillusn ED50=0,78-1,00 niger mg/1 csíracső meg-Candida álbicans a csíracső meghossz, gátlá hosszabodását a MIC-1/3000-1/ (1000-nyi konc.-ban is gátolja) ♦a mikroorganizmusok szaporodásának meggátlásához szükséges legkisebb koncentráció tört része (Antimicrobial Therapy A.M. Ristuccia, B.A. Cumha (Ed) Raven Press, N. Y. 1984) ♦♦irodalom: Brancato, F.P., Golding, N.S.: Mycologia45, 849 (1953) ♦♦♦irodalom: Odds, F.C. et.al.: J. Gen. Microbiol 131,2591 (1985) A „szubmic”-kondentrációban kifejtett hatás azért jelentős, mert úgy tűnik, hogy az azol-típusú vegyületek, így az 1. példa szerinti vegyület is, önmagukban nem fungicidek (nem ölik meg a gombákat), de a gombákat), de a gombák szaporodását in vitro még nem gátló koncentrációkban jelentős hatást fejthetnek ki azok patogenézisében fontos szerepet játszó folyamatok (megtapadás, csíracsőképzés) gátlásában, így így akadályozzák a fertőzés kialakulását (a gomba/baktérium egyensúly megbontásának akadályozásával), illetve a fertőzés tovább terjedését A csíracső meghosszabbodás a patogén saijadzó gombák szaporodásának jól felismerhető első jele, aminek gátlása alapvető fontosságú az immunitásban fontos sejtek és gombák közötti kölcsönhatás immun-sejtek javára történő eltolásához. II.Az 1. példa szerinti vegyület gombaellenes hatékonyságának vizsgálata in vivo 1. Hatékonyság vizsgálata szisztémás candidiasisban [Experimental Modelo in Antimicrobial Chemotherapy Vol. 3., D. Zak, M.A. Saude (Ed.) Academic Press 1986 London-New York]. A vizsgálatokhoz OF 1 random tenyésztett nőstény egereket használtunk, a fertőzést C. Albicans (A 107) (3x10s csíra/állat) fertőző dózissal intravénásán végeztük, a kezeléseket orálisan, 2,17,25,41 és 49 órával a fertőzés után hajtottuk végre. Csoportonként 20-20 állatot használtunk. A kapott eredményeket a 3. táblázatban foglaltuk össze. 3. táblázat Az 1. példa szerinti vegyület hatékonysága szisztémás candidiasisban kezelés elhullás élő statisztikai kezdeti állatok (%) időpontja a fertőzést teszt a fért. után követő (Wilcoxon (nap) 14.ill.21.napon-próba) placebo 5. 45 45-1. példa szerinti vegy. (100mg/kg) 9. 79 47 p < 0,05 Látható, hogy az 1. példa szerinti vegyület hatására a fertőzött állatok elhullása későbbi időpontban kezdődik, és a fertőzés után vizsgált időpontokban több állat marad életben, mint a kezeletlen csoportban. 2. Annak igazolására, hogy az 1. példa szerinti vegyület átjut az agy-vér gáton a fentiekben leírt körülmények között végrehajtott kísérletet túlélő állatok (21. nap) agyából szelektív táptalajon visszaizoláltuk a kórokozót. (A visszaizolálás sikere a gyógyszer hatékonyságával fordítottan változik.) A kapott eredményeket a 4. táblázat szemlélteti. 4. táblázat Az 1. példa szerinti vegyület átjut az agy-vér gáton kezelés po. Pozitív/összes tényezet (%) placebo 2/2 (100) 1. példa szerinti vegyület (100 mg/kg) 6/6 (100) (200mg/kg) 3/7 (43) Az egereken végrehajtott kísérlet eredménye azt bizonyítja, hogy az 1. példa szerinti vegyület megfelelően nagy dózisa esetén a hatóanyag az agyfolyadékban is megjelenik, és ott meggátolja a gombák szaporodását, ezáltal alkalmas a gombák által okozott agyhártyagyulladás kezelésére. 3. Annak igazolása, hogy az 1. példa szerinti vegyület orálisan egereknek adagolva mérhető (biológiailag aktív) szérum-szintet ad Kísérleti állat: OF 1 fehér egér, nőstény; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
