203637. lajstromszámú szabadalom • Táptalaj és eljárás rovarírtó nematódák folyékony tenyészetben történő előállítására
1 HU 203637 B 2 ve 2,0t% szójalisztet, 5,0 X% kukoricacsíra-olajat, szárított állati proteint 0,5 t% EnLivPro-t (Difco) és 20 mg/liter koleszterint tartalmazó táptalajt 30 ml mennyiségben beviszünk egy 125 ml-es autoklávba. A steril táptalajt beoltjuk 3 x 108számúXenorhabdus nemotophilus baktériummal és 28 °C-on inkubáljuk forgó rázógépen 150 ford/perc sebesség mellett. Körülbelül 24 óra múlva Neoaplectana carpocapsaet (valamennyi U) adunk a táptalajhoz annak érdekében hogy 2000,1000,500 és 200 ml sűrűségeket állítsunk elő. A táptalajból mintákat veszünk 5 és 8 nappal a nematódabeoltás után. A következő táblázat bemutatja a teljes nematódaszaporodást a 5. napon és a fertőző juvenil-szaporodást a 8. napon. Inokulum Szója t% 5.nap(U-k) 8.nap(U-k) 2000 1 134000 80000 1000 1 134000 74000 500 1 118000 58000 200 1 85000 66000 2000 2 89000 95000 1000 2 158000 110000 500 2 137000 102000 200 2 141000 95000 A legjobb reproduktív arány 705 volt. Az ily módon ebből a tenyészetből begyűjtött nematódák patogéneknek bizonyultak rovarokra. 2. példa 1 cm alsó átmérővel rendelkező műanyagtálakat használunk 0,25 ml N. carpocapsae tenyészetekhez. A táptalaj összetétele a következő: 0,51% NaCl, 0,251% KH2P04, 3,0 t% (nedves tömeg) élesztősejt, 2,0 t% szójaliszt, 51% kukoricacsíra-olaj, 0,6251% EnLivPro és különböző, alábbi töménységű tojássárgája. A táptalajt beoltjuk 3 x 108 számú X. nematophüus baktériumokkal és 1000/ml N. carpocapsae nematódákkal és az egészet 25 °C-on inkubáljuk. A nematódákat a 7. nap után megszámoltuk. Az eredmények a következők. Tojássárgája Nematódák/ml 1,01% 56500 0,251% 27000 0t% 13000 3. példa 2,0 t% szójalisztet, 1,0 t% tojássárgáját, 0,635 t% szárított állati proteint (EnLivPro, Difco), 0,5 t% élesztősejtet (száraz tömeg), 5 t% kukoricacsíra-olajat, 0,5 \% NaG-t és KH2P04-et, 8,0-as pH, tartalmazó 30 ml térfogatú táptalajt autoklávba viszünk 4 darab 125 ml-es Erlenmeyer-lombikban. Az egyes lombikokban lévő steril táptalajt beoltjuk 3x 10*számú Xenorhabdis nemotophilus baktériummal és 28 °C-on inkubáljuk azokat forgó rázógépen 150 ford/perc sebesség mellett. A lombikok közül kettőt beoltunk 72 óra elteltével egymástól függetlenül körülbelül 1000 juvenillel/ml, amelyek vagy J1-J2 N. carpocapsea inokulum vagy J3-J4 N. carpocapsae inokulum közül kerülnek ki. Nematódákkal való beoltás után a lombikokat 25 °C-on inkubáljuk 150 ford/perc sebességű rázógépen. A nematódák sűrűségét megszámoljuk a kísérlet 7. napjának a végén (168 óra) a nematóda-beoltástól számítva. Juvenü inokulum állapot a következő: Baktériumos inkubálás J Sűrűség a 7. napon 69 óra 1-2 68 500 ± 6557 n-4/2 68,5 óra 3-4 107778 ±10616 n-3/3 n - számolások száma/számolások száma lombikonként Olyan juvenil inokulum használata, amely J3-J4 inokulumot tartalmaz (ennél a kísérletnél nagy részben J3-at tartalmazott) 50%-kal sikeresebb volt, mint a J1 —J2-t tartalmazó inokulum alkalmazásával végzett kísérlet. 4. példa Egy 10 cm átmérőjű és 75 cm magas üvegfermentort air-lift reaktorként működtetünk, amely 5 cm átmérőjű és 20 cm magas szívócsővel van ellátva. Egy 40 mikron porozitású színtereit permetezőfejet helyezünk el a szívócső fenékrészén. Egy N. carpocapsae-kultúrát tenyésztünk a 3. példában leírt módon azzal az eltéréssel, hogy 6 liter térfogatnyit alkalmazunk. Levegőt vezetünk be 6 liter/perc sebességgel a kísérlet alatt. A 7. napon a nematódasűrűség 95 000/ml-nek adódott. 5. példa Egy 20 literes tartályfermentorban (Bioengineering) 16 liter tápközeget beoltunk. 107/ml X. nematophilusszal és 48 óra múlva 1000/ml N. carpocapsaeval. A fermentort 161/perc levegőárammal működtetjük, melyet egy gyűrűalakú szűrőfejen vezetünk be. A fermentort 250 ford/perc sebességgel keverjük mindaddig, ameddig annyi oxigén nem oldódik, hogy a nyomás 85,312 x 102 Pa alá nem csökken. Ekkor a sebességet 300 ford/perc nagyságra növeljük és 50 vagy 100 ford/perc sebességgel növeljük, ha az oldott oxigén (DO) nyomása 85,312 x 102 Pa alá csökken, mindaddig, ameddig a csúcssebesség az 500 ford/perc nagyságot el nem éri. Abban az esetben, ha a DO 127,968 x 102 Pa-ra növekszik, a sebességet 50 vagy 5 10 16 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
