203563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás opioid-polipeptidek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203563B Elemanalízis a C34H39N3O7SCI2 összegképlet alapján: számított: C: 57,95, H: 5,58, N: 5,96%, talált: C: 57,81, H: 5,33, N: 5,92%. 9. lépés: Boc-Tyr(Cl2Bzl)-D-Cys(CH3Bzl)-Gly-Phe-Cys(CH3BZI)- ARg(Tos)-CH3Arg(Tos)-Dl-Leu- Arg(Tos)-NH2 előállítása 983 mg 8. lépésben készült vegyűlet és 226 mg N- hidroxi-benzotriazol 5 ml dimetil-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 316 mg diciklohexü-karbodiimidet adunk, az elegyet két órán át keverjük s utána 1,94 g CF3COOH.H-Phe- Cys(CH3Bzl)- Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu- Arg(Tos)-NH2 (amelyet Boc-Phe-Cys(CH3Bzl)Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk), 0,167 ml N-metü-morfolin és 10 ml dimetil-formamid elegyét adjuk hozzá, és az így kapott oldatot éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így kapott csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet szüikagélből készült oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást metanol és kloroform 1:20 arányú elegyével végezzük, s az így nyert terméket metanol és éter elegyével kezeljük. így szilárd alakban, 2,0 g hozammal jutunk a 9. lépés cím szerinti vegyületéhez, olvadáspont: 123-130 °C (bomlás közben). VRK: Rf-értéke 0,63 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével). [a]D=-17,5°(c= 1, dimetil-formamid) Elemanalízis a C100H129N19O18S5Q2 C2H5OC2H5.3/2CH3ON összegképlet alapján: számított: C: 56,60, H: 6,52, N: 11,89%, talált: C: 56,38, H: 6,18, N: 11,72%. 10. lépés: Tyr- D-Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-Leu- Arg-NH2 előállítása 515 mg 9. lépésben készült terméket 20 ml hidrogén - fluoridban oldunk 2 ml anizol jelenlétében - 5 °C hőmérsékleten, zárt, hidrogén-fluoriddal szemben ellenálló reakcióedényben, az oldatot két órán át keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakciórendszerből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, s utána vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit ERA-93 (ecetsav-típusú) ioncserélő gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. Az így beszárított 320 mg terméket 1,3 liter vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típusú) ioncserélő gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. Az így be-17 szárított 320 mg terméket 1,3 liter vízben oldjuk, és az oldat pH-értékét vizes ammónium-hidroxid oldattal 8-ra állítjuk. Az elegybe 2 napon át keverés közben levegőt vezetünk, majd az elegy pH-értékét 5 6-ra állítjuk, és liofilizáljuk. Az így kapott nyers pepiidet magas nyomású folyadékkromatográfiával tisztítjuk (Nucleosil 5C18,20x25 cm; az eluálást 0,05% sósavat tartalmazó 88:12 arányú víz-acetonitrü eleggyel végezzük). Liofüizálás után a 10. lé- 10 pés cím szerinti termékét, azaz a 2. példa cím szerinti vegyületét 140 mg hozammal kapjuk. VRK: Rf-értéke 0,56 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével). [a]D= -29° (c= 0,4,0,01 n sósav) 15 Tömegszínképi jellemzője (FAB): 1183 (/M+H/ ) Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,02(1); Cys 1,83 (2); Leu 1,04(1); Tyr 0,80(1); Phe 1,00(1); Arg 2,06(2). (A CH3Arg-nak megfelelő csúcsot nem 20 számítottuk ki.) 3-29. példák Az 1. táblázatban bemutatott vegyületeket ugyanazzal a folyadék fázisú eljárással állítottuk elő, mint az 1. és 2. példában leírt vegyületeket. E 25 kísérleteink során az 1 -3 (Tys-Gly-Gly), 4-7 (Phe- Leu-Arg-Arg), 4-8 (Phe-Leu-Arg-Arg-De) és 4-9 (Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Alu) helyzetekben módosított dinorfin-származékokat állítottunk elő a lépésenkénti eljárással, minden egyes peptid esetében A 30 C-terminális oldalról kiindulóan. Ezt követően az 1 -3 helyzetben módosított származékokat a 4-7, illetve 4-8, illetve 4-9 helyzetben módosított származékokkal kondenzáltuk a diciklohexü-karbodiimid + hidroxi-benzotriazol eljárással vagy a vegyes 35 anhidrid módszerrel. Az összes védőcsoportokat eltávolítottak hidrogén-fluoriddal, és az így kapott terméket fordított fázisú vivőanyag alkalmazásával magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítottuk. A 24. példa esetében valamennyi vé- 40 dőcsoportot hidrogén-fluoriddal eltávolítottak, s utána a vegyületet levegővel oxidáltuk, majd magas nyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítottuk. A megfelelő, védett peptidek szintézise során következett reakciósorokat az 1-5. ábrák mu- 45 tátják be. A 6. táblázatban foglaltuk össze azj^y előállított peptidek optikai forgatóképességi [a] D értékeit, a VRK vizsgálat során kapott Rf értéket, valamint az aminosav-elemzés értékeit. 18 5. táblázat A vegyületet A vegyűlet leíró példa sorszáma 3. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NH2 4. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-NHCH2CH(CH3)CH2CH3 5. CKfeTyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-OH 6. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-OC2H5 7. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2 8. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-D-Leu-NHC2H5 9. CH3Ty-rGly-Gly-Phe-Leu-Arg-D-Leu-NH(CH3)5CH3 10. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe(p-N02)Leu-Arg-Arg-D-Leu-NH2 11. CH3Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-homoArg-D-Leu-NH2 10
