203563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás opioid-polipeptidek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
Hü 203563B 5 6 portja dialkilezett, akkor ez külön védelmet nem igényel. A racemizálás megelőzése céljából a védett pepiidet előnyösen lépésenként szintetizáljuk, s ennek az eljárásnak a végrehajtása során a C-terminális oldaláról indulunk el; eljárhatunk azonban úgy is, hogy fragmentumokat kondenzálunk, és ezt a Gly helyzetében hajtjuk végre; eljárhatunk továbbá úgy is, hogy a fragmentum-kondenzációt bármilyen kívánt helyzetben végezzük. A találmány szerinti eljárás végrehajtása során, akár a szilárd fázisú, akár a folyadék fázisú módszert alkalmazzuk, a védőcsoportokat a peptidről eltávolítjuk, és a pcptidet tisztítjuk. Az eljárás végrehajtása során az a) reakcióvázlat szerint járunk el a folyadék fázisban végrehajtott módszerrel. Az a) reakcióvázlatban X1 és X2 hidrogénatomot vagy alkilcsoportot jelent, Y1 és Y2 jelentése valamilyen aminosav-oldallánc, és R’ és R” védőcsoportot vagy peptidmaradékot jelent. (1) A peptidkötést létesítő reakció: A peptidkötést bármilyen eddig ismertetett eljárással létrehozhatjuk. Általánosan alkalmazott eljárás szerint egy, (III) általános képletű savkomponens — ahol X R” és Y2 jelentése a fentiekben meghatározott — karboxilcsoportját aktiváljuk ismert módszerrel, például az azid-, vagy diciklohexil-karbodiimid-, vegyes anhidrid- vagy aktív-észter-módszerrel, és az így kapott aktivált vegyületet reagálta tjük egy (IV) általános képletű aminkomponenssel, amelyben X1, Y1 és R’ jelentése a fentiekben meghatározott. E reakció során a körülményeket, az oldószereket és a hőmérsékletet a karboxilcsoport aktiválására alkalmazott módszer szerint választjuk. A vegyes anhidrid-módszer szerint, amely egyike a típusos kondenzáló eljárásoknak, úgy járunk el, hogy egy (Ul) általános képletű savkomponenst — amelyben X , Y és R” jelentése a fentiekben meghatározott — aprotikus (protonmentes) oldószerben, például dimetil-formamidban, tetrahidrofuránban vagy etil-acetátban oldunk, az így kapott oldatot -20 'C- ra hűtjük és egyenértékű mennyiségben előbb N- metil-morfolint, majd etü-(klór-formiát)-ot adunk hozzá. Az oldatot 5 percig állni hagyjuk, majd hozzáadjuk a (IV) általános képletű vegyületet egyenértékű mennyiségben, az így kapott oldatot -15 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten 2-5 órán át keverjük, s utána a szokásos módon feldolgozzuk. így egy (V) általános képletű, védett formában lévő pepiidet kapunk, amelyben X , X2, Y1, Y2, R’ és R” jelentése a fentiekben meghatározott. (2) Védőcsoport eltávolítása egy a-amino-csoportról: A védőcsoport eltávolítását bármilyen ismert módszerrel, például katalitikus hidrogénezéssel végezhetjük; eljárhatunk azonban úgy is, hogy savat vagy bázist vagy hidrazint alkalmazunk. Az előnyös eljárást az a-amino-csoporton lévő védőcsoport természetétől függően kell megválasztani. Általánosan alkalmazott eljárás például a benzil-oxi-karbonü-csoport eltávolítására a katalitikus hidrogénezés; a terc-butoxi-karbonil-csoport trifluor-ecetsawal hasítható le. Az alábbiakban leírjuk azt az eljárást, amelynek során a terc-butoxi-karbonil-csoportot trifluor-ecetsawal távolítjuk el. Jéghűtés közben 0,25 ml anizolt és 5 ml trifluorecetsavat adunk 1 g (VI) általános képletű a-N-(butoxi-karbonil)-peptidhez, ahol X1, X , Y\ Y és R’ 5 jelentése a fentiekben meghatározott. Az elegyet 60 percig keverjük, majd étert adunk hozzá, s így egy (VII) általános képletű peptid — ahol X1, X2, Y1, Y2 és R’ jelentése a fentiekben meghatározott — trifluor-acetátjához jutunk. E terméket valamüyen ol- 10 dószerben feloldjuk, és egy aminnal — például trietil-aminnal — közömbösítjük; az így kapott terméket visszük a következő reakcióba. (3) Az összes védőcsoportok eltávolítása: A fentebb leírt kondenzáció és az a-amino-cso- 15 portok védőcsoportjai eltávolításának az ismétlése után—aminek során a peptidláncot meghosszabbítottuk — valamennyi védőcsoportot eltávolítjuk, hogy a kívánt pepiidet nyerstermék formában megkapjuk. A védőcsoportokat ismert módon, így kata- 20 litikus hidrogénezéssel távolítjuk el. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy alkálifémet és cseppfolyós ammóniát használunk a redukcióhoz; a védőcsoport eltávolítását végezhetjük továbbá savval vagy bázissal vagy hidrazinnal. A gyakorlatban a védőcsoport el- 25 távolításának módszerét annak kémiai természetétől függően választjuk meg. Gyakran alkalmazott eljárás a védőcsoport eltávolítása hidrogén-fluoriddal, amely a következőképpen történik: 1 g védett formában lévő pepiidet körülbelül 30 30 ml hidrogén-fluoridban oldunk 0,5 ml anizol jelenlétében, -15 °C és 0 °C közötti hőmérsékleten, zárt, a hidrogén-fluoridnak ellenálló reakcióedényben. Az oldatot 60 percig keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakcióelegyből kidesztilláljuk. A maradékot 35 éterrel mossuk, és vízben feloldjuk. Az oldatot Amberlit IRA-93 (ecetsav-típus) gyantával kezeljük, s utána liofilizáljuk. így a védőcsoportok nélküli, nyers pepiidhez jutunk. (4) A nyers peptid tisztítása: 40 Á nyers peptidet ismert módszerrel, így ioncserélő kromatográfiával, gélszűréssel, megoszlásos kromatográfiával, ellenáramú megoszlással vagy nagy teljesítményű (nagy nyomású) folyadékkromatográf iával tisztíthatjuk. A nagy nyomású folya- 45 dékkromatográfia segítségével a tisztítást például a következő módon végezhetjük: 100 mg nyers peptidet betáplálunk egy 20 mm átmérőjű, 250 mm magasságú, vivőanyagként Nucleosil 5 c 18 töltetet tartalmazó víz-acetonitril elegy- 50 gyei végezzük. A kívánt pepiidnek megfelelő csúcsokat mutató frakciókat 210 nm hullámhosszon végzett UV detektálás segítségével összegyűjtjük, és liofilizáljuk. így a kívánt peptidhez jutunk. Ha a peptid két Cys vagy D-cys egységet tartal- 55 máz a molekulájában, akkor a nyers peptidet a tisztítási eljárás előtt ismert oxidációs folyamattal, levegő vagy hidrogén-peroxid segítségével oxidáljuk, s így a tisztítási eljárás után nagy tisztaságú, gyűrűs (ciklizált) terméket kapunk. 60 Az előzőek szerint előállított (I) általános képletű vegyületeket kívánt esetben szervetlen vagy szerves savakkal ismert módon történő reagáltatással farmakológiái szempontból elfogadható sóikká alakíthatjuk. 65 Az alábbi állatkísérletek eredményei mutatják a 4
