203470. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzopirán-2-karbonsav származékokat tartalmazó helyi alkalmazású, bőrgyógyászati, gyulladásgátló hatású készítmények előállítására
1 HU 203 470 B 2 1. táblázat Tesz-vegyület véredénypermeabilitásra kifejtett, dózistól függd helyi hatása, patkányon Koncentráció %-os gátlás (%, dimetil-szulfoxidban) (± átlagos szórás) 2,5 28±4 5,0 50+6 10,0 59±6 15,0 NH 25,0 67±5 NH-nem határoztuk meg. 2. táblázat Tesztvegyület véredény-permeabilitásra kifejtett, dózistól függő helyi hatása, tengeri malacon Koncentráció %-os gátlás (%, dimetil-szulfoxidban) (± átlagos szórás) 1,0 NH 5,0 11±3 10,0 33±3 15,0 43±4 25,0 49±4 NH-nem határoztuk meg. //. Egérfül-ödéma teszt (in vivo) A jelen állatmodell-teszt szerint arachidonsavat a fülre juttatva az 5-hidroperoxi-6,8,ll,14-eikozatetraénsav (5- HETE), leukotrién B4 (LTB^, leukotrién C4 (LTQj), 12- hidroperoxi-5,8,10,14-eikozatetraénsav (12-HETE) és prosztaglandin Ej (PGEj) anyagcsere-termékek (metabolitok) képződnek az adagolás helyén, majd a neutrociták ebbe a helybe áramolnak és 30-60 percen belül gyorsan ödéma alakul ki [Young, Wagner és Spires: „Tachyphylaxis in 12-0-Tetracecanoylphorbol Acetate - And Arachidonic Acid - Induced Ear Edema”. J. Invest. Dermatol. 80:48 (1983) és Humes, Opas and Bonney: „Arachidonic Acid Metabolites in Mouse Ear Edema”. Advances in Inflammation Research, 11:57 (1986)]. A fenti metabolitok és metabolikus pályák inhibitorai az ödémaképződést is gátolják. 15-25 g tömegű CD-I hím egereket alkalmazunk és ezeket az alábbi csoportokba osztjuk be: (1) Kontrollcsoport, amelynek állatai arachidonsavat vagy tesztvegyületet nem kapnak. (2) Arachidonsawal kezelt csoport, amelynek állatai tesztvegyületet nem kapnak. (3) Kezelt csoport, amelynek állatai előbb tesztvegyületet, majd arachidonsavat kapnak. Tesztvegyületként ez esetben is racém 6-acetil-7-[5- -(4-acetil-3-hidroxi-2-propil-fenoxi)-pentiloxi]-3,4- -dihidro-2H-1 -benzopirán-2-karbonsavat alkalmazunk. A (3) csoport esetében a tesztvegyület acetonos oldatát 25 pl-es pipetta segítségével az egerek jobb fülének hátoldali felületére cseppentjük, a tesztvegyület dózisát a 3. táblázatban megadott módon változtatjuk. Egyes esetekben fél óra és más esetekben négy óra elteltével az arachidonsavat ugyanilyen módon helyileg az előkezelt fülfelületekre juttatjuk. Minden esetben 0,5 mg arachidonsav 25 pl acetonnal képezett oldatát alkalmazzuk. Az oldatot 25 pl-es pipetta segítségével helyileg a jobb fül hátsó oldalára juttatjuk. Az egereket egy óra műlva szén-dioxid belélegeztetésével megöljük. Minden kezelt egér füléből 6 mm átmérőjű standard lyukasztásos próbakimetsző segítségével egységes szövetmintákat veszünk és ezek súlyát 0,1 mg pontossággal megmérjük. A fülödéma-képződés százalékos gátlását az alábbi egyenlet segítségével számítjuk ki: arachidonsavas csoport tömetge - tesztcsoport tömege < ^ qq arachidonsavat csoport tömege - kontrollcsoporttömege Az eredményeket a 3. táblázat tartalmazza. Az eredményekből látható, hogy a tesztvegyület 2 mg-ig terjedő dózisban 0,5 és 4 órával az arachidonsavas kezelés előtt beadva szignifikáns ödémagátló hatást fejt ki. 3. táblázat Helyileg alkalmazott benzopiránnak savval előidézett egérfül-ödémára kifejtett gátló hatása ^ Tesztvegyület tömege, mgb %-os gátlás (± átlagos szórás)1 félórás előkezelés Négy órás r -i előkezelés^ 0,1 19±10 26±9 Z. 0,2 21±12 3i±i2 0,5 42±12 28±9 1,0 63±4 37±7 -pr 2,0 65±1 68±7 •* * •-minden meghatározáshoz 8-8 egeret alkalmazunk. b-a tesztvegyület fenti mennyiségét 25 pl acetonban oldjuk és ezt az oldatot alkalmazzuk. Találmányunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy az oltalmi kört a példákra korlátoznánk. 1. példa Helyi alkalmazásra szolgáló készítmény (oldat) Komponenes Mennyiség, g/100 ml lg 2,5 g 5 g racém 6-acetil-7-[5-(4-acetil-3-hidroxi-2-propil-fenoxi)-pentiloxí]-3,4-dihidro-2H-1 - -benzopirán-2-karbonsav lg 2,5 g 5 g Poli(etilén-glikol) 400-zal kiegészítve (PEG) 100 ml 100 ml 100 ml *a PEG 400 helyett izopropil-mirisztát, neobee olaj vagy Capmul MCM 90 (Stokely - Van Camp Inc., Cg_10mono- és digliceridek keveréke) is alkalmazható. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
