203370. lajstromszámú szabadalom • Eljárás főleg nátriuretikus és diuretikus hatású peptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203370B A találmány tárgya eljárás nátriuretikus és diuretikus hatású, az érfalra is ható peptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A14 07 31., a 14 24 87. és a 15 23 33. sz. európai közrebocsátási iratokból ismertek olyan peptidek, amelyek szekvenciája az emberi vagy a patkány természetes atrionátriuretikus faktorának (ANF) rész-szekvenciája. A231752. sz. európai közzétételi iratban (ZA 87/0 272) egyéb ANF-peptideket közölnek. Az új peptidek az 0 általános képletnek felelnek meg, amelyben X jelentése hidrogénatom, arginil-, arginil-arginil-, szeril-szeril-csoport, (P) képletű csoport (Aoc) vagy Aoc-Ser csoport, V jelentése Cys, A jelentése Phe, Tyr(Me), A^ jelentése Gly, Alá vagy D-Ala és A2 jelentése Gly, Alá vagy D-Ala vagy A1 és A2 együtt adott esetben elágazó szénláncú amino-(C3-C8-alkil)-karbonsav B1 jelentése Arg, Lys, Om vagy L-homoarginincsoport. Bejelentése Arg, C; jelentése Ile, Leu, C2 jelentése He, Leu, Pro, ciklohexil-alanin, tercbutil-glicin, neopentil-glicin, D jelentése Asp, Glu, Gin, Asn, E jelentése Gin, Thr vagy Pro, F Ser, és G jelentése Gly, Alá vagy D-Ala, és Z jelentése (II) általános képletű csoport, amelyben J jelentése Asn, Pro vagy Thr D- vagy L-formában, vagy Gly, I jelentése Ser vagy D-Ala, J jelentése Phe, Tyr(Me), ciklohexil-alanilcsoport, K jelentése Arg, Lys, Orn vagy kémiai kötés, L jelentése Tyr, (P) képletű csoport (azaz Aoc) vagy kémiai kötés, és M jelentése OH, NH2, NHR1 képletű csoport, ahol R1 jelentése -(CH2)n-NH2 (amelyben n értéke 3-8) — kivéve az olyan (III) általános képletű vegyületeket, amelyekben X jelentése Ser-Ser, Cr jelentése He, Z jelentése Asn-Ser-Phe-K-L-M, K jelentése Arg vagy kémiai kötés és M jelentése OH- vagy aminocsoport. A találmánya fenti vegyületekfiziológiailag elviselhető sóinak az előállítására is kiterjed. Az (I) általános képletű peptideket úgy állítjuk elő, hogy a peptidet szilárd hordozón fokozatosan felépítjük, majd kívánt esetben a kapott vegyületben egy vagy több védőcsoportot lehasítunk, a két Cys-csoport között diszulfidkötést létesítünk, amikoris az utóbbi két lépést fordított sorrendben is elvégezhetjük, és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű peptidet fiziológiailag elviselhető sóvá alakítjuk. Sóként különösen az alkálifém vagy az alkáliföldfém sókat, a fiziológiailag elfogadható aminokkal alkotott sókat, és a szervetlen vagy szerves sa1 vakkal, így sósavval, hidrogén-bromiddal, kénsavval, maleinsawal, fumársawal alkotott sókat nevezzük meg. A találmány szerinti eljárással kapott peptideket a peptidkémiából általánosan ismét módszerekkel a következő irodalmi helyeken leírt módszerekkel vagy egyéb ismert módszerekkel ekvivalens módon állíthatjuk elő: Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, 15/2 kötet, előnyösen szilárdfázisú szintézissel, így von B Merrif ield, J. Am. Chem. Soc. 55,2149 (1963) vagy R. C. Sheppard Int. J. Peptide Protein Rés. 21,118 (1983). a-Amino védőcsoportként uretán védőcsoportot, így terc-butil-oxi-karbonil (Boc) vagy fluorenilmetil-oxi-karbonil (Fmoc)-védőcsoportot alkalmazhatunk. Amennyiben a mellékreakciók megakadályozásához vagy speciális peptidek szintéziséhez pótlólagosa még az aminosavoldalláncában lévő funkcionális csoportokat megfelelő védőcsoporttal is védeni kell (T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”), akkor elsősorban a következő csoportokat alkalmazhatjuk: Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Asp(OBzl), Asp(OBul), Cys (4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(SBut), Glu(OBzl), Glu(OBut), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(But), Thr(Bzl), Thr(Bul), Trp(Mts), Trp(CHO), Tyr(Br-Z), Tyr(Bzl) vagy Tyr(Bu;. A szilárdfázisú szintézis úgy kezdődik, hogy egy megfelelő gyantán a peptid C-terminális végéhez védett aminosavat kapcsolunk. Hyen jeUegű kiindulási anyagokat úgy állíthatunk elő, hogy egy védett aminosavat klór-metil-, hidroxi-metil-, benzidrilamino(BHA)-, metil-benzhidril-amino(MBHA)csoporttal módosított polisztirol- vagy poliakrilamid-gyantával észter- illetve amidkötésen keresztül összekötünk. A vivőanyagként alkalmazott gyanták a kereskedelemben beszerezhetők. BHA- és MBHA-gyantákat alkalmazunk általában, ha a szintetizált peptid C-terminusan szabad amidcsoportnak kell lenni. Ha a pepiidnek a C-terminálisán szekunder amidcsoportot kell tartalmaznia, akkor klór-metil- illetve hidroxi-metil-gyantát alkalmazunk, és a lehasítást megfelelő aminnal végezzük, ha például az etil-amidot kell előállítani, akkor a peptidet a gyantáról etil-aminnal hasítjuk le, amikoris az oldalláncon lévő védőcsoportok lehasítását ezt követően egyéb megfelelő reagensekkel végezzük. Ha a pepiidben az aminosav terc-butil-védőcsoportjainak oldalláncként meg kell maradni, akkor a szintézist Fmoc-védőcsoportokkal az aminosavak a-amino-csoportjainak időleges blokkolásával végezzük, és ehhez az R.C. Sheppard, J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1982, 587-ben közölt módszert alkalmazzuk, amikoris az arginin guanidino-funkcionális csoportját piridinium-perkloráttal protonálással védjük, és a többi az oldalláncban közreható aminosavak védelmét katalitikus hidrogénátviteHel (A. Felix és mtársai, J. Org. Chem. 13,4194/1978/) vagy folyékony ammóniában nátriummal (W. Roberts, J. Am. Chem. Soc. 76,6203 /1954/) lehasítható benzilcsoportokkal végezzük. Miután a gyantára kötött aminosavak amino-védőcsoportjait megfelelő reagensekkel, így Boc-vé-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
