203321. lajstromszámú szabadalom • Eljárás difenil-szulfid-származékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 203321B 11 12 II. táblázat folytatása: IL-1 vizsgálat eredményei Vegyület Normál szinthez viszonyított növekedés (-szoros érték) Kísérlet száma 1. 2. 3. N’-{4-[(4-fluor-fenil)-szulfonil]-fenü}-N-N-dimetil-acetamidin 1,8 2,5 0,0 1,43 + N’-{4-[(4-fluor-fenü)-szulfonil]-fenü}-N-N-dimetil-acetamidin--mono(hidrogén-klorid) 0,0 2,3 0,0 0,76 + *: EL-1 -szerű aktivitás megnövekedett szintje LPS távollétében N.V.: nem vizsgált +: 1 -2-szeres emelkedés negatív ++: 2-3-szoros emelkedés ±: 1 -szeresnél kisebb emelkedés +++: 3-szorosnál nagyobb emelkedés Átlag Értékelés III. IL-2 termelése Egér limfociták előállítása Az egerek lépét eltávolítjuk és egysejtes szusz- 25 penziókat készítünk oly módon, hogy a lépeket szétdaraboljuk és 40 és 80 mesh lyukméretű rozsdamentes acél szitán átmossuk. Az eritrocitákat 0,83%-os Tris-ammónium-klorid-oldattal 3 percen keresztül kezelve lizáljuk. A sejteket HBSS-sel há- 30 romszor mossuk, végül komplett, 5% FCS-t, 2 mmól/1 L-glutamint, 5xl0’5 mól/12-merkapto-etanolt, 10 mmól/1 HEPES-t, 100 egység/ml penicillint és 100 mg/ml sztreptomicint tartalmazó RPMI- 1640 tápközegben szuszpendáljuk. A sejteket vér- 35 sejt-számlálóval számoljuk, a vizsgált sejtek életképessége minden esetben 98%-nál nagyobb volt, tripánkék festék kizárásán alapuló becslés szerint. Különféle oldható faktorok előállítása és vizs- 40 gálatuk Az IL-2-t úgy állítjuk elő, hogy 107lépsejtet 1 ml közegben 1 mgConA-valstimuláltunk.Áfelülúszókat 2 nap múlva összegyűjtjük és a maradék Con A-t Sephadex G-50-en adszorbeálva vagy a-metil-man- 45 noziddal inkativálva eltávolítjuk. Az DL-2 aktivitást a fent ismertetett timocita proliferációs vizsgálattal határozzuk meg. Ezenkívül, a vizsgálati mintákat három napos Con A stimulálással előállított limfoblaszt tenyészetekhez vagy IL-2-dependens CTLL-2 sejtekhez is hozzáadjuk. A fenti indikátor seüek proliferációját 14 óra múlva határozzuk meg ^HTdR beépülés segítségével. IL-2-szerü faktor termelésének fokozása és helyreállítása normál egérben Normál egerekből vagy 100 mg/kg vizsgált vegyülettel kezelt egerekből nyert limfocitákat 2 napon keresztül Con A-val stimulálunk. A tenyészetek felülúszóját összegyűjtjük és putativ IL-2 aktivitás szempontjából vizsgáljuk 3 proliferációs vizsgálatban, timocitákat, limfoblasztokat és CTLL-2 sejteket használva indikátorként. Noha a normál limfociták felülúszója mindhárom indikátorsejt szaporodását elősegíti, a kezelt állatokból származó limfociták láthatólag több IL- 2-t termelnek, amit a sejt-proliferáció fokozódása jelez mindhárom vizsgált rendszerben. ül. táblázat: IL-2 termelés vizsgálata Vegyület 1. cpm (beütés/perc) Vizsgálat száma 2. 3. 4. Értékelés N\N”’-[szulfonü-bisz(p-fenilén]-bisz[N,N-dimetil-butiramidin] 10979 N.V. N.V. N.V. + N\N’”-[szulfonil-bisz(p-fenilén]-bisz[N,N-dimetü-propionamidin] N.V. 15952 46617 129910 ++ bisz{4-[( 1 -metü-2-pirrolidinil)-imino]-fenU}-szulfon N.V. 17010 N.V. N.V. +++ N’-{4-[(4-fluor-fenil)-szulfonil]-fenil}-N-N-dimetil-acetamidin 4230 N.V. N.V. N.V. + 7
