203255. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hibrid interferonok előállítására

1

HU 203 255 B

2

8. táblázat

(2’-5’)-oligo-izadenilát-szintetáz aktivitás növekedés (beépült ATP pmól/hr/105 sejt

IFN koncentráció (egység/ml)

1

10

100

1000

EFN a-2(,3”

3,6

4,0

5,7

5,6

a-3(,D”)

2,2

3,2

3,2

3,9

>3[B2D3D4”

3,4

33

4,6

4,0

„DiD2B3B4”

2,6

2,1

4,8

4,3

.3,B2B3D4”

9,4

8,4

10,0

8,5

nB1D2B3B4n

5,6

5,7

7,8

11,4

,3iD2D3D4”

5,8

8,9

12,1

17,5

,3,B2D3B4”

5,6

7,0

9,1

9,6

30. példa

Gyógyszerkészítmény (parenterális alkalmazásra)

A „B1DgD3D4” hibrid interferon - specifikus aktivitása 13T08 egységéül humán WISH sejteken - 2 mg-ját 30 ml 5n humán szérum albuminban oldunk fel. A kapott oldatot baktériumszűröo engedjük át és a szűrt oldatot aszeptikuskörühnényekközött elosztjuk 100fiolában úgy, hogy mindegyik 2,6-106 egység tiszta hibrid interferont

olákat célszerűen hűtőben, például -20 °C-on tároljuk.

Hasonló módon készíthetünk 5,2-106 vagy 1.04-107 egységet tartalmazó fiolákat, 4 vagy 8 mg hibrid interferon felhasználásával.

Azonos módon készíthetünk ,3iD2B3B4”, 1vBiB2D3B4”, „BjD^B-jDa”, ,3jD2D3B4” va8y hibrid interferont tartalmazó filákat (specifikus aktivitásuk 1.28-108, 2,108, 7.7-107, 3,8-107, illetve 8-107).

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás hibrid interferon polipeptidek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, amelyeknek az aminosav szekvenciája 2-4 olyan alszekvenciából áll, amelyek az aminosavak azonosságát és számát illetően megfelelnek a LyIFN-a-2 és LyIFN-a-3 humán limfoblasztoid interferonok alszekvenciáinak, azzal jellemezve, hogy prokarióta vagy élesztő gazdasejteket transzformálunk olyan hibrid vektorral, amelynek összetétele a következő:- egy promoter,- egy hibrid interferon polipeptidet kódoló DNS- szekvencia, amely DNS-szekvenciaként a következő polipeptideket kódoló DNS-szekvenciák valamelyikét alkalmazzuk:

polipeptid, amelynek aminosav szekvenciáját a LyIFN-a-2 1-150 aminosava és a LyIFN-a-3151- 166 aminosava alkotja;

polipeptid, amelynek aminosav szekvenciáját a LyIFN-a-2 1-92 aminosava, a LyIFN-a-3 93-150 aminosava és a LyIFN-a-2 151-166 aminosava al-20 kotja;vagy

polipeptid, melynek aminosav szekvenciáját a LyIFN-a-2 1-60 aminosava, a LyIFN-a-3 61-92 aminosava, a LyIFN-a-2 vagy LyIFN-a-3 93-150 aminosava és a LyIFN-a-2 vagy LyIFN-a-3 151— 25 166 aminosava alkotja, amely DNS-szekvenciát az

említett promoter ellenőrzi, és a vektor DNS-t tartalmazó gazdasejtet tenyésztjük és az amlített hibrid interferont izoláljuk és adott esetben, gyógyszerkészítmény előállítására a 30 kapott hibrid interferont gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy adalékanyaggal keverjük össze.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-szekvenciát az alábbi hibrid interfe- 35 ron polipeptideket kódoló DNS-szekvenciák közül választjuk ki:- ,3iB2B3D4” hibrid interferon polipeptid, szerkezete a következő:

40 -CYS ASP LEU PRO GLN THR HIS SER LEU GLY ASN ARG ARG ALA LEU ILE LEU LEU ALA GLN MET ARG ARG ILE SER PRO PHE SER CYS LEU LYS ASP ARG HIS ASP PHE GLU PHE PRO GLN 45 GLU GLU PHE ASP ASP LYS GLN PHE GLN LYS ALA GLN ALA ILE SER VAL LEU HIS GLU MET ILE GLN GLN THR PHE ASN LEU PHE SER THR LYS ASP SER SER ALA ALA LEU ASP GLU THR LEU LEU ASP GLU PHE TYR ILE GLU LEU ASP 50 GLN GLN LEU ASN ASP LEU GLU SER CYS VAL MET GLN GLU VAL GLY VAL ELE GLU SER PRO LEU MET TYR GLU ASP SER ILE LEU ALA VAL ARG LYS TYR PHE GLN ARG ILE THR LEU TYR LEU THR GLU LYS LYS TYR SER SER CYS ALA 55 TRP GLU VAL VAL ARG ALA GLU ILE MET ARG SER LEU SER LEU SER THR ASN LEU GLN GLU ARG LEU ARG ARG LYS GLU,- ,31B2D3B4” hibrid interferon polipeptid, szerke-60 zete a következő:

27