203131. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 1,12-dihidroxi-1,6,12,17-tetraaza-di-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron és az ezt a vegyületet hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

1

HU 203 131 B

2

b) A tumorsejteket a tenyésztéshez használt megfelelő táptalajokban szuszpendáljuk 1*105 sejt/ml arányban, majd ezeket a szuszpenziókat felvisszük a mikrolemezre, egy-egy lyukba 0,2 ml-t juttatva.

c) Szén-dioxidos inkubátorban 37 °C-on 48 órán át tenyésztést végzünk, majd elveszünk 0,1 ml sejtszuszpenziót és ezt százszorosára hígítjuk ISOTON II jelzésű- anyaggal, vagy fiziológiás sóoldattal. Az így kapott hígításban a sejtek számát Coulter típusú számlálóval megszámoljuk.

d) A sejtnövekedés százalékos gátlását a kontrollal összehasonlításban a mintaoldat minden egyes hígítására kiszámítjuk. A kapott eredményeket felvisszük megfelelő papírra, hogy létrehozzuk a Bisucaberin koncentrációja és a százalékos gátlás összefüggése adta görbét. Ebből a görbéből meghatározzuk az IC50 értéket, azaz azt az értéket, amely megfelel a Bisucaberin 50%-os gátlást biztosító koncentrációjának. A százalékos gátlási és IC50 értékeket a 2. és 3. táblázatokban adjuk meg.

2. táblázat

Tumor- A minta koncentrásejtek ciója (pg/ml)

Sejtszám

Százalékos

gátlás

L-1210 kontroll

2888±106

_

Bisucaberin

100,0

429147

85

25,0

425±3

85

6,25

908±11

69

1,56

2428±100

16

0,39

2727±151

6

IMC kontroll

3910196

_

karci- Bisucaberin

100,0

557126

86

nóma

25,0

547116

86

6,25

1712124

56

1,56

3374144

14

0,39

360212

8

3.

táblázat

Tumorsejtek

IC50 (pg/ml)

L-1210

3,9

IMC karcinóma

5,1

Visszatérve az ábrákra, a 2. ábra tehát a Bisucaberin infravörös abszorpciós spektrumát mutatja be. A 3. ábrán referenciaanyagként tetrametil-szilánt használva, dő-DMSO-val készült oldatban a Bisucaberin proton- NMR-spektrumát adjuk meg. A 4. ábrán referenciaanyagként DMSO-t használva dő-DMSO-val készült oldatban a Bisucaberin 13C-NMR-spektrumát adjuk meg.

4. példa

20 pmól/ml foszfatidil-kolint, 2 pmól/ml foszfatidilszerint és 1 mg/ml Bisucaberin-t tartalmazó kloroformos oldatot lombikban csökkentett nyomáson filmmé bepárolunk, majd liposzóma-készítményt állítunk elő úgy, hogy Nortex-keverővel vizet adagolunk a kloroformnak vákuumban való tökéletes eltávolítása után. Ezután 0,2 pm lyukmérető membrán-szitán át való szűréssel sterilizálást végzünk. Ez a művelet a liposzómák szemcseméretét egységesíti. A készítmény 4 'C-on több, mint egy hónapon át biztonságosan tárolható nitrogéngáz alatt. A készítmény felhasználható orálisan, nem- orálisan vagy helyileg.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az új (I) képlett? l,12-dihidroxi-l,6,12,17-tetraaza-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron előállítására,

azzal jellemezve, hogy valamely Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó mikroorganizmust tenyésztünk, majd a fenti vegyületet a fermentléből elkülönítjük.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó mikroorganizmusként az Alteromonas haloplanktis SB- 1123 (FERM BP-1360) törzset tenyésztjük.

3. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) képletű vegyületet a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítjuk.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

5