203118. lajstromszámú szabadalom • Eljárás renin-gátló dipeptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 118 B 2 DCI Desorption Chemical Ionisation DIP diizopropiléter DNP 2,4-dinitrofenil-csoport DMF dimetil-formamid DMSO dimetil-szulfoxid EE etil-acetát El Electron Impact Etoc etoxikarbonil-csoport FAB Fast atom bombardment H hexán HOBt 1 -hidroxibenzotriazol ív a izovaleril-csoport M molekulacsúcs MeOH metanol MS tömegspektrum MTB metil-terc-butil-éter op. olvadáspont Sta [3S,4S]-4-amino-3-hidroxi-6-metil-heptánsav Thi ß-2-tianilalanin THF tetrahidrofurán Z benziloxikarbonil-csoport Az aminosavak jelölésére alkalmazott egyéb rövidítések megfelelnek a peptidkémiában szokásos hárombetűs kódnak [Europ. J. Biochem. 138, 9-37 (1984)]. Ha másként nem adtuk meg, mindig az L- konflgurációjú savról van szó. Az alábbi példákkal a találmányt közelebbről ismertetjük, a találmány azonban nem korlátozódik a példákra. A példákban közölt Rf-értékeket Kieselgel GO márkájú kovagélen mértük. 1. példa Iva-Phe-His-l(S)-ciklohexilmetil-2(S)-hidroxi-6--oxo-6-fenil-hexilamid 150 mg Iva-Phe-His(DNP)-l(S)-ciklohexilmetil- 2(S)-hidroxi-6-oxo-6- fenil-hexilamid 5 ml acetonitril és 0,1 ml tiofenol elegyével készített oldatát szobahőmérsékleten 10 órán át keverjük, utána vákuumban betöményítjük és kieselgélen kromatografáljuk. A terméket tartalmazó frakció bepárlása során sárgás por alakjában kapjuk a cím szerinti terméket. Rf (CH2Cl2/MeOH 12/l)-0,2; MS (FAB)-672 (M+l) a) Iva-Phe-His-(DNP)-l(S)-ciklohexilmetil-2(S)-hidroxi-6-oxo-6-fenil-hexilamid 300 mg Iva-Phe-His(DNP)-OH, 46 pl piridin és 80 pl N-etil-piperidin 5 ml diklór-metánnal készített elegyéhez -5 °C-on 70 pl pivaloil-kloridot adunk. Az elegyet 5-10 ”C-on 30 percen keresztül keverjük, majd -10 °C-ra hűtjük és 165 mg l(S)-ciklohexilmetil-2(S)hidroxi-6-oxo-6- fenil-hexilamin 5 ml diklór-metánnal készített oldatát csepegtetjük hozzá. Az elegyet hűtés nélkül 16 órán át keverjük, vákuumban bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot háromszor vizes kálium-karbonát-oldattal, egyszer vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és kieselgélen etil-acetáttal kromatografáljuk. A cím szerinti terméket enyhén sárgás por alakjában kapjuk. Rf) (EE)-0,3; MS (FAB)-838 (M+l). b) Iva-Phe-His(DNP)-OH előállítása: J. Am. Chem. Soc. 86, 1839 (1964) c) l(S)-ciklohexilmetil-2(S)-hidroxi-6-oxo-6- -fenil-hexilamin 200 mg 3-Boc-4(S)-ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5- (4-dimetil- hidrazono-4-fenil-butil)-oxazolidin 10 ml dimetoxietánnal készített oldatához hűtés közben, mintegy 10 ”C-on 10 ml telített, dimetoxietános sósav-oldatot csepegtetünk, és az elegyet 3 órán át keverjük, majd bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, az oldat pH-értékét telített nátrium-karbonát-oldattal 9-10 értékre állítjuk, és az oldatot háromszor etil-acetáttal extraháljuk. Szárítás után kinyerjük a cím szerinti vegyületet, amelyet tisztítás nálkül alkalmazunk a következő lépésben. d) 3-Boc-4(S)-ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5- -(4-dimetil-hidrazono-4-fenil-butil)-oxazolidin 203 mg acetofenon-dimetilhidrazon [előállítása: J. Org. Chem. 31, 677 (1966)] 10 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatához argonlégkörben -78 °C- on 0,8 ml n-butil-lítiumot (1,5 M hexánban) csepegtetünk. 15 perc elteltével 303 mg 3-Boc-4(S)- ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5-(2-brómetil)-oxazolidin 3 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adagoljuk, és az elegyet hűtés nélkül még 2 órán át keverjük. A vízzel hígított elegyet etil-acetáttal háromszor extraháljuk, a szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk és a maradékot kieselgélen kromatografáljuk (futtató elegy: EE/hexán 1/5) Rf (hexán/EE 8/1)—0,5; MS (DCI)-478 (M+l) e) 3-Boc-4(S)ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5-(2- -brómmetilj-oxazolidin 690 mg 3-Boc-4(S)-ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5- (2-hidroxietil)-oxazolidin, 2,6 g trifenilfoszfin és l,6g piridinium- hidrobromid 15 ml diklór-metánnal készített elegyéhez argonlégkörben 20 "C-on 1,6 ml azodikarbonsav-dietilésztert csepegtetünk. Az elegyet szobahőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk, majd vízzel hígítjuk és 100 ml diklór-metánnal mossuk. A szerves fázist elválasztjuk és kétszer telített nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, egyszer telített konyhasó-oldattal mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A maradékot kevés etil-acetátban felvesszük, és a trifenilfoszfin elválasztása céljából szűrjük. A további tisztítást kieselgélen végezzük (futtató elegy: H/EE 15/1). Rf (H/EE 15/l)-0,3; MS (El) 404 (M) f) 3-Boc-4(S)-ciklohexilmetil-2,2-dimetil-5-(2- -hidroximetilj-oxazolidin 10 g Boc-ACHPA-OEt [J. Med. Chem. 28, 1179 (1985)], 500 mg p- toluolszulfonsav és 7,2 ml dimetoxi-propán 160 ml toluollal készített elegyét argonlégkörben 2 órán át 80 °C-on tartjuk, utána betöményítjük. A maradékot 0 "C-on 2 g LÍAIH4 200 ml tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához csepegtetjük, Az elegyet 0 °C-on 2,5 órán át állni hagyjuk, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
