203113. lajstromszámú szabadalom • Eljárás adriamicin és sói előállítására
5 HU 203 113 B 6 víz 10 ml aceton 10 ml pH 11-re állítva (I-b) 14-acetoxi-daunomicin hidrolízise vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban 14-acetoxi-daunomicin 0,01 g aceton-metanol 2:1 térfogatarányú elegy 5 ml 5%-os vizes nátrium-hidrogén-kaíbonát-oldat 1 ml víz 3 ml (2) 14-(Trifluor-metánszulfonil-oxi)-daunomicin savas hidrolízise (2-a) Hidrolízis vízzel 14-(trifluor-metánszulfonil-oxi)-daunomicin-hidrogén-klorid 0,2 g víz 20 ml pH 2,4 (2-b) Hidrolízis 0,05 mól/1 koncentrációjú foszfát-pufferrel (pH 6,0) 14-(trifluor-metánszulfonil-oxi)-daunomicin-hidrogén-klorid 0,2 g 0,05 mól/1 PBS (pH 6,0) 20 ml pH 42 A vékonyréteg-kromatográfiát (TLC) az alábbi körülmények között végezzük: TLC-lemez: Merck Art 5715 futtatóelegy: kloroform/metanol/ecetsav = 20:4:1 TLC-kiértékelés: Shimazu TLC scanner CS-930 hullámhossz: 495 nm Az eredményeket az alábbi táblázatban ismertetjük. Hidrolízis pH TLC scann» analízis Reakciómódja eredmények idd Hidroli- Adria- Kiinduzátum micin lási anyag Lúgos hidrolízis (1-a) nátrium- 11 30,4 62,0 12 50 perc-foszfát (1-b) 5%-os vizes 11 36,0 46,0 9,6 18 óra NaHCOj Savas hidrolízis (2-a) H20 2,4 4,5 81,7 13,7 25 óra (2-b) 0,05 mól/1 42 6,1 83,9 9,9 70 perc PBS (pH 6) * 1 PBS: foszfát-puffer-oldat 1. összehasonlító példa Az adriamicin-hidrogén-kloridot a 3 803 124 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 1. példája szerint állítjuk eló. Ha a 14-bióm-daunomicint a 3 803 124 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 1. példája szerint állítjuk elő, a hozam 18,3%. Ezért a reakciókörülményeket az alábbiak szerint módosítjuk. 1,0 g (1,555 mmól) 14-bróm-daunomicin-hidrogén-klorid - amelyet a 4 360 664 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerinti eljárással állítunk elő -150 ml metanollal készült oldatához 70 ml desztillált vizet adunk, és nitiogénatmoszférában, 20 ‘C-on 0,1 n nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával az oldat pH-ját 10,3-ra állítjuk. A fenti pH-értéken a 14-bróm-daunomicin-hidrogén-kloridot 20 percen keresztül hidrolizáljuk. A reakcióelegyhez 130 ml desztillált vizet adunk és kloroformmal ötszöt extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. A? oldószert eltávolítjuk és a maradékhoz 1,86 ml 0,6 n hidrogén-klorid-oldatot adunk (metanolban, f = 0,967). Az adriamicin-hidrogén-kloridot 70 ml éter hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot szűrjük és a szűrletet 60 ml éterrel mossuk és szárítjuk. 0,6766 g adriamicin-hidrogén-kloridot kapunk, amelynek relatív tisztasága HPLC eljárással meghatározva 58%. A kapott adriamicin-hidrogén-kloridot megkíséreltük kristályosítani, propanol-metanol, kloroform-metanol, vagy metilén-klorid-metanol oldószerből, a fenti amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 1. példájával összhangban, azonban alacsony tisztasága miatt nem lehetett kristályosítani. A kapott adriamicin-hidrogén-klorid tisztaságát nem tudtuk fokozni. 2. összehasonlító példa Az 1. összehasonlító példához hasonlóan, ha a 3 803 124 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 1. példáját megismételjük, nem sikerül nagytisztaságú adriamicin-hidrogén-kloridot előállítani (a hozam csak 18,3%). Ezért az előállítási körülményeket bizonyos mértékig megváltoztatva igyekeztünk adriamicin-hidrogén-kloridot előállítani. 1,0 g (1,555 mmól) 14-bióm-daunomicint - amelyet a 4 360 664 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 2. példája szerint állítunk elő - 200 ml desztillált vízben oldunk. Az oldathoz 20 *C-on, nitrogénatmoszférában, 0,1 n nátrium-hidroxid-oldatot adva a pH-t 10,3-ra állítjuk, és a hidrolízist ezen a pH-értéken 20 percen keresztül játszatjuk le. A reakcióelegyhez 150 ml metanolt adunk, és kloroformmal ötször extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert eltávolítjuk. A maradékot kloroform és metanol 10: 1 térfogatarányú elegyében oldjuk, és hozzáadunk 3,01 ml 0,6 n hidrogén-klorid-oldatot (metanolban, f=0,967). Az elegyet koncentráljuk és alacsony hőmérsékleten állni hagyjuk. A kapott csapadékot szűréssel elválasztjuk, kloroformmal mossuk. 0,2152 g adriamicin-hidrogén-kloridot kapunk, amelynek HPLC eljárással meghatározott relatív tisztasága 94,1%, a hozam 23,9%. 3. összehasonlító példa Az adriamicin-hidrogén-kloridot 14-acetoxi-daunomicinből állítottuk elő, a 3 803 124 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 2. példája szerinti eljárással. A 2 803 124 számú merikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 1. példáját megismételve a 14-bróm-daunomicint 18,3%-os hozammal kapjuk. 0,6 g (0,944 mmól) 14-bióm-daunomicint - amelyet a 4 360 664 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 2. példája szerint állítunk elő - 200 mmól vízmentes acetonban szuszpendálunk, és hozzáadunk 1,8 g megömlesztett kálium-acetátoL Az elegyet visszafolyató hűtő alatt 45 percen keresztül forraljuk. Az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
