203112. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BU-3608 antibiotikumok N-alkil-származékainak és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 HU 203 112 B 6 jük. A kivált sötétvörös szilárd anyagot kiszűijük és vákuumban szárítjuk. Ezt a szilárd anyagot n-butil, metanol és 1%-os nátrium-klorid oldat 3:1:4 térfogatarányú elegyében oldjuk, majd 30 percig keverjük. Az alsó vizes fázist elválasztjuk, friss felsó réteggel mossuk, 6 n sósavval pH 2,0-re savanyítjuk és aztán n-butanollal extraháljuk. Az n-butanolos extraktumot vízzel mossuk, vákuumban bepároljuk, és lifolizáljuk, így félig tiszta BU-3608-hidrokloridot kapunk. A szilárd anyag n-butanolos oldatát lúgos 9,0 pH-jú vízzel rázzuk. A vizes réteget pH 2,0-re savanyítjuk és etil-acetáttal mossuk. n-Butanollal való extrakció és az oldószer vákuumban való eltávolítása után egy tisztább BU-3608-hidroklorid mintát kapunk. Ezt az anyagot azután fordított fázisú kovasavgélen kromatografáljuk. (ODS-60, 350/250 mesh, Yamamura Chemical Láb., 4,5 x 9 cm-es oszlop). A mintát vízben oldjuk, és az acetonitril 1 : 0,15%-os kálium-dehidrogén-foszfát (pH 3,5) 17 : 83 térfogatarányú elegyével egyensúlyba hozott oszlopra visszük. Az oszlopot egymást követően 5-5 liter acetonirtril 1-0,15%-os kálium-dehidrogén-foszfát 17:83,18:82,19: 81,20:80 térfogatarányú eleggyel mossuk, majd ugyanilyen komponensek 22 : 78 térfogatarányú elegyével kifejlesztjük. Az eluátumot 100 mles frakciókban gyűjtjük, és összetételét mikrolemezen C. albicans A9540-nel és kovasavgélen metil-acetát, n-propanol és 28%-os ammónium-hidroxid 45 : 105 : 60 téríbgatarányú elegyével vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk. A fő, homogén vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük és tovább tisztítjuk, így BU-3608 komplexet kapunk. A fenti módon végzett fordított fázisú kromatográfiás eljárás során a fő, homogén BU-3608 előtt és után kapott frakciókat egyesítjük. Az egyesített eluátumot HP-20 gyantával sómentesítjük, így BU-3608 B-t és BU-3608 C-t tartalmazó szilárd anyagot kapunk. A BU-3608 B-t tartalmazó szilárd anyagot vízben oldjuk, és egy ODS-60 (Yamamura Chem. Láb., 8,0 x 90 cm) oszlopra visszük, és az oszlopot acetonitril és 0,15% kálium-dihidrogén-foszfát 22 : 78 térfogatarányú elegyével alaposan mossuk. Ugyanezt az oldószert használjuk a töltött oszlop eluálására, és frakciókat gyűjtünk, amelyeket HPLC eljárással vizsgálunk. A BU-3608 B tartalmú frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, és HP-20 gyantán kromatografálva sómentesítjük, így szennyezett BU-3608 frakciót, tiszta BU-3608 és BU-3608 B frakciót kapunk. A BU-3608 B-t preparatív HPLC technikával rövid Microsorb C18 oszlopon (4,6 mm/belső átmérő x 100 mm, 3 pm, Rainin Instrument Co.) tovább tisztítjuk, az eluációhoz acetontril és 0,15%-os kálium-dihidrogén-foszfát-oldat (pH 3,5) 29 : 71 térfogatarányú elegyét használjuk. A BU-3608 C-t tartalmazó szilárd anyagot hasonló módon, ODS oszlopon, acetonitril és 0,15% kálium-dihidrogén-foszfát-oldat (pH 3,5) 21: 79 térfogatarányú elegyével eluálva tisztítjuk. Az eluátum tartalmát nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással vizsgáljuk, a BU-3608 C-t tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A kapott vizes oldatot HP-20 adszorbensen kromatografálva sómentesítjük, így csaknem tiszta BU-3608 C-t és csaknem tiszta BU-3608-at kaptunk. A fenti fordított fázisú kovasavgélen végzett kromatográfiás eljárásban a BU-3608 C előtti frakciókat külön gyűjtjük és egyesítjük. Az egyesített halvány narancsszínű frakciókat D-anion HP-20 adszorbensen kromatografálva sómentesítjük. A kapott szilárd anyag aránylag gazdag D és E komponensekben, de még mindig sok C komponenst tartalmaz. Az egyesített szilárd anyagokat fordított fázisú kovasavgél oszlopra (ODS-60, Yamamura Chem. Láb., 8,0 x 90 cm) visszük, és acetonitril és 0,15%-os kálium-dihidrogén-foszfát-oldat (pH 3,5) 21: 79 térfogatarányú elegyével eluáljuk. Az eluátumot rövid C18 Microsorb oszlopon nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel vizsgáljuk, acetonitril és 0,15%-os káhum-dihidrogén-foszfát-oldat (pH 3,5) 7:17 térfogatarányú elegyét használva mobil fázisként, 1,2 ml/perc átfolyási sebességnél, és a detektálás 254 nm-es UV fényben történik. Először a BU-3608 E, majd a BU-3608 D eluálódik. A BU-3608 E-t tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, majd HP-20 adszorbensen kromatografálva sómentesítjük, így csaknem homogén BU-3608 E-hidroklorídot kapunk. A BU-3608 E-hidroklorid vizes oldatának pH-ját 0,1 n nátrium-hidroxiddal 5-re állítjuk, így a tiszta BU-3608 E zwitterion formájában válik ki. Hasonló módon a BU-3608 D-t is zwitterion formájában izoláljuk. 3. példa A (lile) képletű dexilozil-BU-3608 E előállítása 97 mg BU-3608 E-hidrokloridot 12 ml 2 n sósavban oldunk, és leforrasztott csőben 70 percig 115 *C-on tartunk. A kapott oldat pH-ját 1 n nátrium-hidroxiddal 5,5-re állítjuk be, majd centrifugáljuk az elegyeL Az így kapott szilárd anyagot izopropanollal és acetonnái mossuk, így 87 mg dexilozil-BU-3608 E-t kapunk. Op.: 205-209 *C (bomlik) UV lambda äS1 ” N,OH nm(epszilon): 235,2 (23600), 319,2 (11100), 498,4 (10800). 4. példa A (III a) képletű dexilozil-BU-3608 C előállítása A 3. példában leüt eljárást követjük, kiindulási anyagként BU-3608 C-hidrokloridot használunk, termékként a cím szerinti vegyületet kapjuk. Op. 208- 215 #C (bomlik). 5. példa N-metil-BU-3608 B (II); R2 = H; R1 = R3 = R4 = CH3 előállítása 540 mg BU-3608 és 60 ml 2 n sósav elegyét leforrasztott csőben 70 percig 115 'C-on melegítjük, majd lehűtjük. A kapott szilárd anyagot 3000 percenkénti for-, dulatszámmal centrifugálva összegyűjtjük, vízben szuszpendáljuk, és a pH-t 6 n nátrium-hidroxid adagolásával 11,7-re állítjuk A 60 ml oldatot 300 ml acetonhoz adjuk, és a szilárd formában kivált BU-3608 B-t összegyűjtjük. Ezt a szilárd anyagot 20 ml vízben oldjuk, és az oldatot, miután pH-ját 1 n sósavval 8,3-ra állítottuk be, 20 ml acetonitrillel hígítjuk. Az oldathoz szobahőmérsékleten egymást követően 0,8 ml 37%-os vizes formaldehidet és 120 mg nátrium-ciano-bór-hidridet adunk, és az oldatot szobahőmérsékleten keverjük 15 órán át. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a vizes maradékot keverés közben acctonhoz csepegtetjük. A kivált szilárd anyagot acetonnal mossuk, majd szárítjuk, így 440 mg N-metil-BU-3608 B-t kapunk nátriumsó formájában. Ebből a sóból 50 mg-ot vízben oldunk és az oldat pl-I-ját 1 n sósavval 6,0-ra állítjuk. A kivált szilárd anyagot vízzel mossuk és liofilizáljuk, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
