203112. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BU-3608 antibiotikumok N-alkil-származékainak és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 112 B 2 A találmány a BU-3608 antibiotikum komplex N-alkil-származékainak az előállítására vonatkozik. Ezek a vegyületek hatásos gombaellenes szerek. A BU-3608, BU-3608 B és a BU-3608 C antibiotikumok fermentálási, elkülönítési és tisztítási eljárását részletesen az 1987. november 2-án bejelentett 4 870 165 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmunk leírása ismerteti, a BU-3608 D és BU-3608 E antibiotikumok elkülönítését és Uszítását az 1988. június 7-i amerikai egyesült államokbeli elsőbbségű 345,735 számú közzétett európai szabadalmi bejelentésünkben írtuk le. A fentiekben említett öt antibiotikum szerkezetét az Iáié képletek szemléltetik. A BU-3608 azonban vízben nagyon korlátozottan oldódik. így e jelen talámány célja a BU-3608 antibiotikum komplex egyes komponensei vízoldható származékának előállítása. A találmány (II) általános képletű vegyületek - a képletben R1 hidrogénatom vagy metilcsoport, ez utóbbi esétben az alanilrész D-alanil-csoport; R2 hidrogénatom vagy (Ila) képletű béta-D-xilozil-c söpört; Y -NR3R4 vagy -N*R3R4R5X általános képletű csoport, amelyben R3, R4 és R5 azonos vagy különböző, és 1-5 szénatomos alkilcsoportot jelent; és X egy anion -valamint gyógyászatilag elfogadható sóik előállítására vonatkozik. A találmány szerinti vegyületek előállításához kiindulási anyagként a BU-3608, BU-3608 B, BU-3608 C, BU-3608 D és BU-3608 E jelű antibiotikumokat használjuk, amelyek az Actinomadura hibisca Pl 57-2 és Q278-4 törzsekkel fermentációval állíthatók elő, e törzsek az ATCC-nél (Rockville, MD) kerültek deponálásra, azonosítási számuk ATCC 53557 és ATCC 53646. A Pl 57-2 törzsből N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidinnel (NTG) kapott mutáns a D és E komponenseket a P157-2 és Q278-4 törzshöz képest is nagyobb mennyiségben termeli. Ez a mutáns törzs az A2660 jelet kapta, és az ATCC-nél szintén deponálásra került, deponálási száma ATCC 53762. A BU-3608 B a BU-3608 dexilozii-származéka. A BU-3608 B-t, valamint a BU-3608 C, D és E dexilozil-származékát úgy állíthatjuk elő, hogy a BU-3608-t, a BU-3608 C-t, D-t és E-t sósavban annyi ideig melegítjük, míg a xilózcsoport lehasad, majd az oldat pH-ját a megfelelő értékre beállítjuk és a kívánt termék kiválik. A BU-3608, BU-3608 C, D, E vagy a megfelelő dexilozil-származékok aminocsoportja reduktív alkilezéssel alkilezhctő, oly módon, hogy a kiindulási antibiotikumot először egy aldehiddel vagy ketonnal reagáltatjuk, és a képződött imint redukáljuk. A kondenzációt és redukciót egyugyanazon edényben, egy lépésben vagy két külön lépésben végezhetjük. A BU-3608 C, E vagy ezek dexilozil-származékainak primer aminocsoportját átalakíthatjuk olyan tercier aminná, amely két azonos alkilcsoportot tartalmaz, ekkor az antibiotikumra számítva két ekvivalens karbonilvegyületet használunk a reakcióban, majd a kapott terméket redukáljuk; vagy olyan tercier aminná, amely két különböző alkilcsoportot tartalmaz, ekkor az első karbonilvegyület ellenőrzött mennyiségével a primer amint szekunder aminná, majd a második, az előzőtől eltérő karbonilvegyülettel tercier aminná alkilczzük. A karbonil reakciópartner lehet valamely aldehid vagy Keton, amely 1-5 szénatomot tartalmaz, ilyen például a formaldehid, acetaldehid, propionaldehid és aceton. Az imin redukciójához például fémhidrid, így nátrium-bór-hidrid, nátrium-ciano-bór-hidrid, lítium-alumínium-hidrid redukálószereket liasználhatunk. A reakciót poláros szerves oldószerben vagy azok elegyében, így vízben, acetonitrilben, kevés szénatomos alkanolokban és dimetil-szulfoxidban végezhetjük. A reakció hőméréséklete különösebben nincs korlátozva, szobahőmérséklet és kb. 100 °C között változhat A kísérleteinkben az alkilezési reakciót szobahőmérsékleten játszattuk le, és 24 óra alatt teljesen végbement. Az optimális reakciókörülmények nyilvánvalóan az adott reagáló vegyületek természetétől és reakciókészségétől függően változnak. Az aminocsoportok alkil-halogeniddcl is alkilezhetők, és az (I), (III) vagy (II) általános képletű, Y helyén -NR3R4 általános képletű csoportot tartalmazó vegyületek kimerítő alkilezésével kvatemer ammóniumvegyületeket is előállíthatunk. A különböző antibiotikumok oldhatóságát foszfát-puffert tartalmazó sóoldatban határoztuk meg (PBS), és a kapott értékeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze. A PBS (-) olyan oldatot jelöl, amely literenként 0,2 g kálium-kloridot, 0,2 g kálium-hidrogén-foszfátot, 8 g nátrium-kloridot és 1,15 gdinátrium-hidrogén-foszfátot tartalmaz; a PBS (+) oldat a fentiek mellett még 100 mg magnézium-klorid-hexahidrátot és 100 mg kalcium-kloridot is tartalmaz. Vegyidet Oldhatóság (az előállítási (pg/ml) példa száma) PBS (-) PBS (+) 5. 330 42 6. 2100 122 7. 1800 2000 8. 3100 3 9. 73 32 10. 2700 — Összehasonlításként megadjuk, hogy a BU-3608 oldliatósága a PBS (-) oldatban 16-18 pg/ml és a PBS (+) oldatban 9-23 pg/ml. Látható, hogy a (II) általános képletű vegyületek megnövekedett oldhatósággal rendelkeznek a BU-3608 vegyülethez képest A jelen találmány szerinti vegyületek antifungális hatását in vitro és in vivo kísérletekben is értékeltük. A különböző gombákkal szemben mutatott minimális gátlási koncentárciókat (MIC) Sabouraud dextróz agáron végzett sorozathígításos módszerrel határoztuk meg. így kb. 0,003 ml, 106 sejt/ml koncentrációjú gombaszuszpenziót vittünk fel a vizsgálandó antibiotikumokat tartalmazó agar lemezek felületére. A tenyészetet 44 órán át 28 'C-on inkubáltuk, majd a MIC értékeket meghatároztuk. Az adatok az I. táblázatban láthatók. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
