202915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nyomelemekkel dúsított magas biológiai értékű növényi szövet- és sejttenyészetek és ezeket tartalmazó diétás- és gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 915 B 2 1. példa A klónozásra előkészített sárgarépa (Danucus carota) merisztémát tartalmazó gyökér darabkákat steril módosított szilárd White táptalajon növesztjük. A White táptalaj összetétele: 0,2 g/1 nátrum-szulfát, 0,08 g/1 káliumnitrát, 0,065 g/1 kálium-klorid, 0,165 g/1 nátrium-dihidrogén-foszfát, 3 mg/1 mangán-szulfát, 0,5 mg/1 cink-szulfát, 0,5 mg/1 bórsav, 0,025 mg/1 réz-szulfát, 1 mg/1 vas-citrát, 7,5 mg/1 glicin, 1,25 mg/1 niacin, 0,25 mg/1 tiamin HC1, 0,25 mg/1 piridoxin HC1, 0,25 ml kalciumpantotenát, 2 mg/1 indol-ecetsav, 20 g/1 szacharóz, 8 g/1 agar-agar. A növesztést 26 °C-on végezzük 20 naponkénti továbbosztással, a megvilágítást 16 órás periódusokkal alkalmazzuk. Miután a megfelelő mennyiségű szövet rendelkezésünkre áll a levél- és gyökérrészecskékből, az agar-agar nélküli folyékony Gamborg (B5) táptalajon (Tissue Culture Methods and Application Edited by Perui F. Kruse JR. and M.K. Patterson, J.R.: Academic Press New York and London, 1973, Murashige, T.: Nitrition of Plant Cells and Organs in vitro 9, 81- 85, 1973, Conger B.V. és munkatársai: Cloning Agricultural Plant via in vitro Technigues CRC Press 1981) Calcott PH: Continuous Cultures of Cells CRC Press 1981) szuszpenziós kallusz kultúrát készítünk, és ebben növesztjük őket tovább folyamatosan működő tenyésztő rekatorban. Az inkubációs idő 26 °C-on 20 nap, a megvilágítási periódusok 16 órásak. A tápoldat germánium tartalmát 10"9 - 5* 10"2 M koncentráció között növeljük a végkoncentráció eléréséig egyenlő arányban 4 naponkénti adagolással. 2. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el. A csíráztatott növény bab (Phaseolus vulgaris). A gyökér merisztéma eredetű kalluszból származó szövet tenyészet tenyésztése 22 'C-on 28 napig történik. A dúsításra került nyomelem kobalt, CoCl2*6H20 formájában, induló koncentrációja 4,2* 10"8 M, végkoncentrációja 4,2* 10’3 * M. Adagolás 2 naponként egyenlő arányban a végkoncentrációig. Eredmény mikronizált, légszáraz szövet szuszpenzióban: 560 pg/g (18,0 pg/g) Co. 3. példa 200 g laktózhoz keverés közben 20 g Aerosil (Degussa, NSZK) márkanevű kovasavat adunk, és 40 g, a 2. példa szerinti 3%-os nedvességtartalmú liszt formájú növényi hatóanyagot adunk, és inert atmoszférában homogenizáljuk. Nedvesítés után gyúrógépen 30 percig kevertetjük, amíg egy tészta konzisztenciájú masszát nyerünk, amelyből ismert módon granulátumot képezünk. A granulátumot inert gáz atmoszférában fluid szárítóba szárítjuk. A szárítás végeztével a granulátumot megőröljük, és ismert módon 250 mg-os kemény zselatin kapszulába töltjük. Ily módon 1000 db, a kobalthiány tüneteit megszüntető kapszulát kapunk. 4. példa A 2. példa szerinti növényi hatóanyag 40 g-ját 220 g kukorica-csíra olajjal homogenizáljuk, és ismert módon hidegen sajtolt lágyzselatin kapszulázó berendezésben 250 mg-os ovális kapszulákba töltjük. A lágyzselatin kapszula készítése a Farmitalia cégnél történt. 5. példa A 2. példa szerinti, mikronizált növényi hatóanyag 40 g-ját összekeverjük V. szitafinomságú 140 g laktózzal, 20 g szacharózzal, 26 g burgonykeményítővel, 4 g magnézium-sztearáttal és 4 g VI. szitafinomságú talkummal. A homogenizálás után a porkeveréket V. szitán átszitáljuk, majd 2%-os vizes zselatin oldattal nedvesítjük 2,0 mm-es rostán áttörve granuláljuk, tálcán megszárítjuk, és gépi úton (laborméretű Korschféle excenteres tablettázógép) 250 mg-os tabletákká préseljük. 6. példa Az 5. példa szerinti tablettákat Erweka drazsírozó üstben drazsírozzuk cukros drazsírozással. A 10 alapréteg felviteléhez 60%-os cukoroldatot és alapozó porként kalcium-karbonátot alkalmazunk. Kis részletekben sárga színű ételfestékkel színezzük, majd végül fehér viasszal fényesítjük a drazsékat. 7. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy táptalajokhoz a desztillált víz helyett 80% mennyiségben Parádi ásványvizet adunk. A növényi anyag átveszi az alkalmazott víz mikroelem összetételét. 8. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy tápoldatként 100% mennyiségben hévízi gyógyvizet alkalmazunk. A növényi anyag átveszi az alkalmazott víz mikroelem összetételét. 9. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy tápoldatként 100% mennyiségben margitszigeti termálvizet alkalmazunk. A növényi anyag átveszi az alkalmazott víz mikroelem összetételét. 10. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy tápoldatként 50%-ban hajdúszoboszlói gyógyvizet, 30%-ban pedig Mohai Ágnes ásványvizet alkalmazunk. A növényi anyag átveszi az alkalmazott víz mikroelem összetételét. 11. példa Mindenben az 1. és 7-10. példa bármelyike szerint járunk el, azzal a különbségei, hogy a vas, a réz és a cink koncentrációit emeljük meg vas-citrát, réz-szulfát és cink-szulfát alakban. Kezdő koncentrációk: 1,7*10'5 * * 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
