202872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dimer indol-alkaloid-keverék, katarantin és vindolin szétválasztására és kinyerésére alkaloid-keverékből
1 HU 202 872 A 2 légy, előnyösen széntetraklorid-diklóretán 3:1-1:1 térfogatarányú elegy és víz fázisai között pH-6,9- 7,1 értéken megosztva tisztítják, majd a kapott szerves fázist 1:1-3:1 térfogatarányban 5-25 tömeg% borkősavat tartalmazó vízzel extrahálják, a vizes-savas fázisban feldúsult katarantint tartarát-só formájában leválasztják, majd kívánt esetben szulfát-só formájában izolálják, a vindolint tartalmazó szerves fázisból a vindolint bepárlás és szilikagél- oszlopon végzett kromatográfiás tisztítás után oldószerből, elő-nyösen dietiléterből izolálják. Az eljárással kapott terméket ismert gyógyszerhatóanygok illetve azok intermedierjei. A találmány tárgya új, ipari eljárás dimer indol-alkaloid- keverék, katarantin és vindolin szétválasztására és kinyerésére bázis vagy savaddíciós só formájában rózsameténg (Vinca rosea L.) drogjából származó, az összes alkaloidot tartalmazó, ún. sűrítményből vagy száraz maradékból, a dimer indol-alkaloidok szulfát-só formájában történő elválasztása, a kapott, főként katarantint és vindolint tartalmazó anyalúg extrakciós és/vagy oszlopkromatográfiás úton való feldolgozása, a kapott katarantint és vindolint tartalmazó oldatok tisztítása, majd a katarantin és vindolin izolálása útján. Ismeretes, hogy a rózsameténg, illetve katarantusz drog igen nagy számban és aránylag kis koncentrációban tartalmaz monomer és dimer indol-alkaloidokat. Dimer indol-alkaloidként a vinkrisztin és vinblasztin a legismertebb, de a drog különböző vinkamin, ill. vimblasztin-származékokat és leurozin-vegyületeket is tartalmaz. Ezeket összefoglaló néven dimer indol-alkaloidoknak nevezzük. Első időkben a dimer indol-alkaloidok, azon belül is a vinblasztin felhasználása került előtérbe, mivel 1959-ben kiderült, hogy citotasztikus hatással rendelkezik. így jól alkalmazható például akut leukémia terápiás kezelésében. [Johnson. I.S.: Cancer Res. 20, 1016 (1961)]. Később egyéb dimer indol-alkaloidokat, így elsősorban a vinkrisztint is hatékonynak találták, ezek még a vinblasztinnál is előnyösebben alkalmazhatók citosztatikumként. [Svoboda G.H.: Lloydia 24,173. (1961)]. A dimer indol-alkaloidok (ezenbelül különösen a vinblasztin) drogból való izolálására több szabadalmaztatott eljárás is ismét. Ezek azonban csakis a vinblasztin tisztán való kinyerését teszik lehetővé. Ilyenek például a 3 097 137 számú, 3 205 220 számú, 3 225 030 számú USA-beli vagy a 153 200 számú és a 164 958 számú magyar, valamint a 150 019 számú és a 150 024 számú indiai szabadalmi leírások. A monomer indol-alkaloidok - ezen belül főként a katarantin és a vindolin - is jelentőssé és fontossá váltak, mert kapcsolásukkal és azt követő átalakításokkal belőlük új, gyógyászatiig jól hasznosítható vegyületek nyerhetők. [Tetr. Lett. 3945 (1976), 2 558 124 számú NSZK-beli szabadalmi leírás, Helv. Chim. Acta 59, 2858 (1976)]. A katarantusz drog vizes metanolos extrakcióját, majd fáziscserékkel történő tisztítását a 160 967 számú magyar szabadalmi leírás ismertette először. A tisztítási műveletekkel megszabadultak a ballasztanyagok és a nem kívánatos társalkaloidok egy részétől. A kapott száraz-maradékból kénsavas etanollal a dimer indol-alkaloidok főtömegét leválasztják, majd a nyers dimer-szulfátból a vinblasztint és az egyéb dimereket különböző pH-értékeken végzett szelektív extrakciókkal, illetve alumínium-oxidon végzett kromatografálással választották szét. A 178 084 számú magyar szabadalmi leírás a fenti módon kapott dimer nyers-szulfát anyalúgjának feldolgozását és abból monomer- és dimer-alkaloidok kinyerését ismerteti. Az egyes komponenseket különböző pH-értéken végzett extrakciókkal és/vagy alumínium-oxidon történő kromatografálással és kristályosításokkal választották szét. A fenti két módszerrel sem sikerült azonban a három legfontosabb komponens; a vinblasztint is magába foglaló egyéb dimer indol- alkaloidok, valamint a katarantin és a vindolin egyidejű, magas hozadékú kinyerését megoldani. A találmány célja tehát olyan eljárás kidolgozása, mellyel a fenti feladat jól megoldható. Vizsgálataink során azt a meglepő felismerést tettük, hogy ha egy összes alkaloidot tartalmazó sűrítményből vagy száraz maradékból - amelyet például a 193 761 számú magyar szabadalmi leírás ismertet - végezzük a dimer alkaloidok főtömegének szulfát- formában való leválasztását, mégpedig gyenge, 3,5-nél magasabb pK-értékű sav jelenlétében, akkor - ellentétben az eddig ismert eljárásokkal - egyrészt a dimerszulfát-sók kitűnő termeléssel izolálhatok, másrészt az igen érzékeny monomerek (vindolin, katarantin) bomlása csaknem teljesen elkerülhető. Ez a felismerés azért meglepő, mert azt találtuk, hogy a jelenlévő gyenge sav (például ecetsav, borkősav, citromsav vagy fumársav) elvégzi a monomerek sóképzését és egyben a rendszer pufferolását is. így felismertük, hogy a dimerek sóképzéséhez az eddig használtnál jóval kevesebb kénsav szükséges, ezzel megakadályozható a dimerek kénsavban történő visszaoldódása és bomlása. A fenti módon képzett dimer nyers-szulfátból az egyes dimer indol-alkaloid-komponenseket már ismert módon kinyerhetjük. Felismertük azt is, hogy a szulfát-só leválasztásánál kapott anyalúg - amely főként katarantint és vindolint tartalmaz - egy sajátos arányú szerves oldószer-savas víz-rendszerrel való kezelésével kitűnő szétválasztást, illetve izolálást érhetünk el. Azt találtuk, hogy ebből az anyalúgból a katarantinnak és vindolinnak a számos egyéb „szennyező” alkaloidoktól való durva elválasztását, ugyanakkor egymástól történő szétválasztását szilikagélen végzett osz-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
