202863. lajstromszámú szabadalom • Eljárás flavonszármazékok előállítására
1 HU 202 863 B 2 1. táblázat LD50 értékek mg/kg-ban egereken (A hatóanyagok jelét lásd a példákban) A hatóanyag Adagolás i.p. Adagolás p.o. (i) 889 3000 (iii) 1000 3000 (iv) 222 3000 (V) 959 3000 (Vi) 1000 3000 (viii) 1000 3000 (xii) 597 3000 A receptor-kötődési kísérletekhez patkányok agysejtmembránjait alkalmaztuk. 2 ml térfogatú reakcióelegyet 60 percen át 25 °C hőmérsékleten 0,45 nM 3H-nitrendipinnel és a különböző koncentrációban hozzáadott vizsgálati vegyülettel inkubáltuk. Az IC50- értékeket olyan gátlási görbékből határoztuk meg, amelyek a 3H-nitrendipin kötődését ábrázolták a megfelelő specifikus kötődési helyen az adott antagonista vegyület jelenlétében; a számítás nem-lineáris módszerrel végeztük. Példaként néhány eredményt mutatunk be a 2. táblázatban. 2. táblázat A kalcium-antagonista kötődési helyen (patkányokon) mutatott hatás A hatóanyag ICso(M) (i) 5,55x10’ (iii) 8,81x10’ (iv) 3,03x10’ (v) 8,36x10’ (vi) 1,30x10’ (viii) 3,06x10’' (x) 1,35x10‘! (xi) 5,45x10’* (xii) 3,19x10" (xiv) 1,46x10'' (xvi) 3,96x10'* (xviii) 1,66x10’! (XX) 4,91x10'* A fenti táblázatban IC50 értéken értjük a vegyületnek azt a koncentrációját, amely a 3H-nitrendipin specifikus kötődésének maximális értékét 50%-kal csökkenti. A vizelet-dinamikai paraméterekre gyakorolt hatásokat cisztometriás vizsgálatokkal értékeltük ki. E vizsgálatokat éber patkányokon Pietra és munkatársai módszerével (ERCS Medicinal Science, sajtó alatt, 1986) értékeltük ki, hasonlóan Sjogren munkamódszeréhez [Acta Pharmacol. Toxicol. 39, 111 (1976)]. A húgyhólyagon belüli nyomást fiziológiás konyhasóoldatnak a húgyhólyagba 0,15 ml/perc állandó sebességgel, 37 °C hőmérsékleten történő, folyamatos infúziója során határoztuk meg. Feljegyeztük a húgyhólyag térfogati kapacitását és a vizeletürítés nyomását a találmány szerinti vegyületek orális úton való adagolása előtt és után; a perfúziót a vizsgálati vegyület adagolása után 60 perccel indítottuk. Példaként néhány eredményt mutatunk be a 3. táblázatban. 3. táblázat Patkányokon végzett cisztometriás vizsgálatok eredményei A hatóanyag Dózis A húgyhólyag A vizeletürítés mg/kg térfogati nyomásának p.o. kapacitásának változása % változása % (i) 10 +18-14 30 +21-19 (Üi) 30 +15-1 (V) 10 +19-16 30 +22-23 (vi) 30 +31-1 A találmány szerinti eljárást az alábbi nemkorlátozó jellegű kiviteli példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 8-Formil-3-metil-flavon - (II) képletű vegyület - előállítása 59,74 g 3-metil-8-Ílavon-karbonsavklorid (amelyet 3-metil-8- flavon-karbonsavból és tionil-kloridból állítottunk elő, fehér kristályos anyag, olvadáspontja: 156-156,5 °C), 200 ml xilol, 6 g 5%-os bárium-szulfátra lecsapott palládium-katalizátor és 0,4 ml kinolinos kénoldat elegyét keverés és állandó hidrogénátvezetés közben 6-7 órán át 85-90 °C hőmérsékleten melegítjük, majd lehűtjük, 20 ml kloroformmal hígítjuk, szűrjük, az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékhoz 260 ml 20 tömeg %-os nátrium-hidrogénszulfít oldatot és 600 ml vizet adunk. Az így kapott keveréket 2 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk, majd forrón szűrjük. A lehűtött szűrletet négyszer, egyenként 200 ml dietil-éterrel extraháljuk, tömény sósavat adunk hozzá, és 2 órán át 95-100 'C-on melegítjük. Lehűtés után a csapadékot szűrjük, és vízzel mossuk. így 78%-os hozammal jutunk a cím szerinti vegyülethez (az elméleti hozam; 41,46 g), amelyet további reakciókhoz ebben a minőségben felhasználhatunk. Metil-terc-butil-éterből átkristályosítva a termék 124-126 °C hőmérsékleten olvad. Példa az a) eljárásra: l,4-Dihidro-2,6-dimetil-4-(3-metil-8-flavonil)-piridin-3,5-dikarbonsav-dimetil-észter - (i) jelű vegyület - előállítása 7,94 g 8-formil-3-metil-flavon (előállítását lásd fentebb), 4,1 g acetecetsav-metil-észter, 4,14 g 3-ami-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
