202709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herbicid szerekkel szemben rezisztens kultúrnövények előállítására és védelmére
HU 202709B perlit) helyezzük át, és az első 4-7 napon keresztül 90-100% relatív nedvességtartalom mellett tenyésztjük. Ezután a növényt vagy klímaberendezésben, vagy üvegházban tenyésztjük tovább. A 2-4. újabb levelek kialakulásáig a regenerált kukoricát hidrokultúrában tartjuk. Ezután a növényt földbe (homokos kertiföld) ültethetjük át. 5.Herbiciddel szembeni rezisztencia vizsgálata A4- vagy 5-leveles fejlődési szakaszban levő növényt a szokásosan alkalmazott mennyiségben kezeljük a herbicid-oldattal, glufozinát és dimetilfoszfinüdiidroxi-ecetsav esetén 50-200 mg hatóanyag/ni koncentrációban bepermetezzük a növényt, ez 0,5-2 kg hatóanyag/ha dózisnak felel meg. A herbicidet 0,1-1%-os vizes oldat formájában használjuk. A kezelt növényt 14-28 nap múlva vizuálisan értékeljük. A herbicid-rezisztencia vizsgálatot olyan körülmények között végezzük, amely körülmények között a szokásos kukoricahibridek (kontroll növény) súlyos károsodást (károsodás mértéke 90%) szenvednek. A herbicid hatását a regenerált növényre a 2. táblázatban foglaljuk össze. 2. táblázat: Dimetil-foszfonil-hidroxi-ecetsav és DL-glufozinát herbicid hatása herbicid-rezisztens kalluszokból nyert regenerált növényre (kiértékelés a herbicid alkalmazása után 4 héttel) 7 Herbicid Dózis8 (kg/ha) Károsodás mértéke (%) Kontroll Regenerált növény növény dimetüfoszfinü-0+0 0 0-hidroxiecetsav 0,5+0,5 95 15 0,75+0,75 90 10 1,0+1,0 75 5 D,L-glufozinát 0 0 0 0,75 90 0 1,0 98 10 а. két érték megadása esetén az alkalmazás két részletben történt, 10 napos intervallummal a két alkalmazás között б. Regenerált növény herbicid-rezisztenciájának átörökíthetősége A glufozináttal kezelt regenerált növények egy része érett növénnyé fejlődik. Ezeket önbeporozzuk, és keresztezési kísérletekben hibrid-szülőként (pollen-donorként) alkalmazzuk, herbicid-érzékeny (vad típus) genotípusokkal, például Karat (I fajta) vagy Edo (II fajta) típusokkal. A beporzás után 6 héttel begyűjtjük az érett magokat. Az Fi-generáció tenyésztését klimakamrában, 25 "C nappali hőmérsékleten, 14 órán keresztül 30000 lux-szal megvilágítva, 20 “C éjszakai hőmérsékletet és 60% relatív nedvességtartalmat biztosítva végezzük. A növényeket egységes földben tenyésztjük. A vetés után 14 nappal a növényeket 3- 4 leveles fejlődési szakaszukban ammóniumglufozináttal (BASTAR, gyártja: Hoechst AH, kereskedelmi készítmény) permetezzük, A hatóanyagot 0,75 és 1,5 kg/ha dózisban alkalmazzuk. A herbiciddel végzett kezelés eredményeit a kezelés után 4 héttel értékeljük ki, az eredményeket a 3. táblázatban ismertetjük. 3. táblázat: Glufozinát-rezisztens regenerált kukorica F i -generációjának herbicid-rezisztenciája 8 Genotípus Károsodás mértéke (%) 0,75 kg/ha 1,5 kg/ha I fajta 80 95 nfajta 90 100 vad típusú regenerált növény 95 100 önbeporzással 3 növényben 2 növényben nyert Fi-gene-85 95 ráció, 10 vizsgált 7 növényben 6 növényben növényből 20 40 I fajta és rezisztens 6 növényben 2 növényben 20 7 növényben regenerált növény kérész-85 95 tezése, 10 növényből 4 növényben 3 növényben * 20 30 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás aminosav-bioszintézist gátló anyagokkal szemben reziszlens kultúrnövény előállítására, azzal jellemezve, hogy a. kiválasztjuk azokat a kalluszkultúrákat, illetve sejtszuszpenziót-kultúrákat, amelyek aminosavmentes tápközegben embriogén és morfogén sajátságaik megtartásával növekednek, b. az így kapott kultúrákat aminosavmentes, gátló anyagot tartalmazó tápközegben tenyésztjük, és kiválasztjuk a gátló anyaggal szemben rezisztens kultúrákat, amelyekből az ép növényt regeneráljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként egy vagy több fiziológiásán elfogadható szerves savval vagy annak egy sójával kiegésztett tápközeget alkalmazunk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként a citrátkör savjaival vagy azok sóival, vagy piroszőlősawal vagy annak sójával kiegészített tápközeget alkalmazunk. 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 0,1-10 mmól/1 koncentrációban adagolt savakkal vagy sókkal kiegészített tápközeget alkalmazunk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 0,5-2 mmól/1 koncentrációban adagolt savakkal vagy sókkal kiegészített tápközeget alkalmazunk. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljá-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
