202591. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BU-3420T antibiotikum, valamint ilyen antibiotikumot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202 591 B 2 A találmány tárgya eljárás az új, baktériumellenes, gombaellenes és daganatgátló hatású (I) képletű BU-3420T antibiotikum, valamint e vegyületet hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A BU-3420T szerkezetvizsgálata azt mutatta, hogy két konjugált helyzetű hármaskötést (konjugált „diin”-egységet) tartalmaz. E szokatlan szerkezeti egységet újabban fedezték fel az eszperamicinckben [J. Am. Chem. Soc. 109, 3462 (1987)] és a kalichemicinekben [J. Am. Chem. Soc. 109,3466 (1987)], amelyek rendkívül hatásos daganatgátló antibiotikumok. Ezeket az antibiotikumokat egy Actinomadura törzs (lásda4675187 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírást), illetve egy Micromonospora törzs (Program and Abstracts of 26lh Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1986 szeptember, 227. kivonat) termeli. Úgy vélik, hogy az eszperamicin Aj, illetve A2 azonos a 4 530 835 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölt CL-15775A, illetve B antibiotikumokkal. Az eszperamicinck továbbá szerkezeti rokonságban vannak a 4 578 271 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetett WS-6049A, illetve B antibiotikumokkal. A CL-1577A vagy B egyik fragmentumát, amelyet CL-1577-B4-nek jelölnek, a 4 661 353 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölték; az eszperamicin vagy A2 fragmentumait - amelyek BBM-1675C és D jelöléssel láttak el - a 2 179 649 A számú publikált nagy-birtanniai szabadalmi bejelentésben ismertették. A BU-3420T antibiotikum gombák, Gram-negatív, Gram-pozitív és anaerob baktériumok számos csoportjával szemben gátló hatású, emellett in vitro és in vivo daganatgátló hatást mutat, továbbá kiindulási anyagul szolgálhat a BU-3420T fokozott hatású, (II) képletű triacetátjának ecetsavanhidrides acetilczéssel történő előállítására. Ez utóbbi eljárás külön szabadalmi bejelentésünk tárgyát képezi. A BU-3420T antibiotikumot úgy kapjuk, hogy egy BU-3420T-t termelő Micromonospora chersina törzset asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó vizes tápközegben, merített kultúrában, aerob körülmények között addig tenyésztünk, amíg a mikroorganizmus a tenyésztőközegben lényeges mennyiségű BU-3420T-t termel, majd a BU-3420T-t a tenyésztőközegből elkülönítjük. A találmány azoknak a gyógyászati készítményeknek az előállítására is vonatkozik, amelyek segítségével emlős gazdaegyedek baktériumos, gombás fertőzései vagy rákos daganatai kezelhetők. Ezek a gyógyászati készítmények a BU-3420T baktérium-, gomba- vagy daganatgátló hatású mennyiségét gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal összekeverve tartalmazzák. A találmány révén lehetővé válik gazdaállatok baktériumos vagy gombás fertőzéseinek kezelése, amely abban áll, hogy a gazdaállatnak BU-3420T vagy e vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmények gombaellenes vagy antibakteriális hatású mennyiségét adagoljuk. A találmány révén végül lehetővé válik daganatnövekedés gátlásának megvalósítását emlős gazdaállaton oly módon, hogy a gazdaállatnak a BU-3420T-1 vagy e vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmény daganatgátló hatású mennyiségét adagoljuk. A rajz rövid magyarázata. Az 1. ábra a BU-3420T (Kbr-ban felvett) infravörös elnyelési színképét mutatja. A találmány szerint a BU-3420T antibiotikumot egy új BU-3420T termelő Micromonospora chersina törzs fermentációjával állítjuk elő. Az előnyösen termelő organizmus új Micromonospora chersina törzs, amelyet a továbbiakban Micromonospora chersina M956-1 törzsnek nevezünk. E törzset az indiai Gujarat államban gyűjtött talajmintából izoláltuk. Az M956-1 törzs biológiailag tiszta tenyészetét az American Type Culture Collection (ATCC) gyűjteményében (Washington, D. C.) helyeztük el, és ATCC 53710 sorszámmal vették fel a mikroorganizmusok állandó gyűjteményébe. Az M956-1 törzset főbb jellemzői alapján a Micromonospora nemzetségbe soroltuk; az M956-1 törzsön és rokon fajokon végzett összehasonlító vizsgálatok arra utalnak, hogy e törzs sajátságai a következők. Morfológiai jellemzők; Az M956-1 törzs 0,5 |im méretű vegetatív micélíumot alkot, amely hosszú, erősen elágazó, nem fragmentált. Légmicélium nem alakul ki, azonban egyes közegekben alkalmilag kezdetleges léghifák figyelhetők meg. Az egyes spórák a vegetatív hifákon vannak. Pásztázó elektronmikroszkópos felvételek azt mutatják, hogy a spórák 1,2-1,8 pm méretű gömbök, amelyek nyeletlenek, vagy hosszabb-rövidebb monopodiális spóra tartókon helyezkednek el, és nyalábokat képeznek. A spóratartó csúcsán párosán vagy hármasban clhelyezkedő, különálló spórák is megfigyelhetők. A spórák felületén rövid, tompa tüskék figyelhetők meg. A tenyészet jellemzői; Az M956-1 törzs szaporodása a 2. számú és 4. számú ISP közegben és a Bennett-agaron mérsékelt, míg bármely Czapek-féle szaccharóz-nitrát-agar táptalajon igen lassú, ugyanígy az 5. és 7. számú ISP közegekben is. A vegetatív micélium színtelen vagy halvány narancssárga, spóraképződés után halványszürkére vagy feketére változik. A 2. számú ISP közegben és a Bennettagarban sűrű spóratömeg képződik. Melanoid, vagy más - felismerésre alkalmas - pigmentek nem termelődnek. Egy hónap elteltével 28 'C hőmérsékleten, a Czapek-féle szaccharóz-nitrát-agaron és a 4. számú ISP közegben egy fluoreszkáló, sárga, diffundáló pigment képződik. Az M956-1 törzs tenyészeti jellemzőit az 1. táblázatban foglaltuk össze. Fiziológiai jellemzők; Tenyésztési (szaporodási) hőmérséklettartománya 18 °C-tól 49 °C-ig terjed. 15 “C-on és 50 °C-on nem figyelhető meg szaporodás; a szaporodás optimálisan 37 °C és 44 °C között megy végbe. A zselatint clfolyósítja, a keményítőt hidrolizálja. 3%-os nátrium-klorid jelenlétében tolerancia (tűrőképesség) figyelhető meg, 4% nátrium-klorid esetében viszont tolerancia nem jelentkezik. Tirozináz-aktivitása negatív. Az azonosításra alkalmas cukrokat a Pridham-Gottlieb-féle szervetlen közegben az alábbiak szerint hasznosítja: L-arabinózban, D-xilózban, szaccharózban, melibiózban, raffinózban és oldható keményítőben pozitív; glicerinben, D-arabinózban, D-ribózban, L-ramnózban, cellulózban, inozitban és D-mannitban negatív; laktózban és szalicilban jelentéktelen. A fenti szervetlen kö-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
