202589. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D,C-2-amino-4-metil-foszfino-vajsav immobilizált sejtekkel történő szétválasztására
3 HU 202 589 B 4 szemben határozzuk meg, egyszer közvetlenül, és egyszer butil-acetátos vízzel végzett regeneráló mosás után. 2. példa 30 ml immobilizált E. coli sejtek (3. biokatalizátor) felhasználásával, a 10 t%-os fenacetil-foszfinotricin-oldatot az 1. példa szerint, de örvényágyas rendszerben, pH 8,1 mellett hidrolizáltatjuk. A penicillin-G-káliumsó enzimes bontásban nyilvánuló aktivitást az 1. példa szerint mérjük. A katalizátor-térfogatra vonatkoztatott hozam: 30 g L-foszfinotricin/litcr biokatalizátor és óra. 3. példa Egy liter űrtartalmú, pH-szabályozással felszerelt keverő reaktorban 480 ml 10 1%-os fenacetil-foszfinotricin-oldatot 7,7 pH mellett 35 “C-ra melegítünk. 10 g nedves 1. biokatalizátor adagolással elindítjuk a reakciót és a pH-t híg ammóniaoldat adagolásával szabályozzuk. Huszonnégy óra múlva a reakcióoldatot elválasztjuk a biokatalizátortól és a reakciót új szubsztrátoldat adagolásával elindítjuk. A példák alapján alapján kapott eredményeket a következő 1. táblázatban közöljük. Példa Hordozó Reakcióidő Aktivitási száma (óra) veszteség (%) i 1 7 16 2 7 17 1 18 29 1 30 50 2 3 10 3 3 23 3 3 1 7 16 4. példa A 2. példa szerint járunk el, de az enzimes hidrolizálást a) butil-acctáttal, 5 b) terc-butil-metil-éterrel, c) metil-izobutil-ketonnal telített vízben végezzük. Az aktivitás veszteség 10 óra elteltével 0%, 24 óra elteltével 10 a) 2%, b) 4%, c) 2,5%. A reakció követését nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel oldottuk meg, az alábbi paraméte- 15 rek mellett: oszlop: RP 8 áramlási sebesség: 20 ml/perc nyomás: 16—18.106 Pa oldószer víz és metanol 1 : 1 térfogatarányú elegye, 20 pH = 2,1. A fenilecetsav detektálása 206 nm hullámhossznál történt. 25 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás D,L-2-amino-4-metil-foszfino-vajsav immobilizált sejtekkel történő szétválasztására, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület (I) képletű fenacetil- 30 származékát vizes vagy vizes-szerves közegben kitozánon vagy kitozánban immobilizált E. coli ATCC 11105 sejtekkel 20-45 *C-on, 3 és 9 közötti pH-érték mellett inkubáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, 35 hogy a vizeS'közeget ecetsav-butil-észterrel, terc-butil-metil-észterrel vagy metil-izobutil-ketonnal telítjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 30-40 *C hőmérsékleten végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, 40 hogy az inkubálást 6-8,5 pH-n végezzük. 0 II CH3- P- CH2- CH2-CH - NH -C0 -CH2 - C6H5 OH C00H 3
