202521. lajstromszámú szabadalom • Hatóanyagként triazol-oligoéter-származékot tartalmazó fungidid készítmények és eljárás a hatóanyag előállítására
HU 202521 B 11. Példa In vivo teszt árpán a lisztharmatért felelős Erysiphe graminis f. sp. hordei gombával Finom őrléssel a vizsgálandó hatóanyagból olyan vizes emulziót állítunk elő, amelynek összetétele a következő: vizsgálandó hatóanyag 90 mg Tween 80 (etilén-oxid szorbitánnal alkotott kondenzá túrnának oleátja) 10t%-os vizes oldata 0,45 ml víz 90 ml Ezt a vizes emulziót hígítjuk azután vízzel a kívánt koncentrációra. Cserepekben termőtalajba ültetett és 10 cm magasságú állapotban levő árpát a fentiekben ismertetett koncéntrátumból készített vizes emulzióval (permetezhető elegynek nevezzük) kezelünk. A tesztet kétszeres ismétlésben végezzük. 24 óra elteltével az árpanövényeket beporozzuk Erysiphe graminis csíráival, a beporzáshoz megbetegedett növényeket használva. A fertőzés után 8-12. nappal végezzük el a kiértékelést. Ilyen körülmények között a következő eredményeket kapjuk: 0,1 g/liter felhasználási arányban az 1. példa szerinti termék és a 2. példa szerinti „A” termék 95%-os vagy ennél nagyobb, vagyis teljes védelmet nyújt. 12. Példa In vivo teszt búzán a barna üszögért felelős Puccinia recondita gombával Cserepekben termőtalajba ültetett és 10 cm magas búzát all. példában ismertetett összetételű, hatóanyagot különböző mennyiségekben tartalmazó vizes emulziókkal (permetező elegynek nevezzük ezeket) permetezzük. A tesztet mindegyik koncentrációval kétszer megismételjük. 24 óra elteltével a búzát vizes spóra-szuszpenzióval (50000 spóra/cm3) permetezzük be, a szuszpenziót fertőzött növényeket használva készítjük. Ezt követően a búzát 48 órán át közel 18 'C hőmérsékletű és 100%-os relatív páratartalmú inkubációs cellában tartjuk. 2 nap elteltével a relatív páratartalmat 60%-ra csökkentjük. A növények állapotának megfigyelését a fertőzést követő 11. és 15. nap között végezzük, a kezeletlen kontroll összehasonlításban. Ilyen körülmények között a következő eredmények figyelhetők meg: 13 0,1 g/liter dózisban az 1. példa szerinti és a 2. példa szerinti, A” termék teljes védelmet biztosít. 13. Példa 5 Magvakat és talajt fertőző gombákkal végzett in vitro kísérletek Vizsgáljuk a találmány szerinti vegyületek hatását gabonafélékben másodlagos megbetegedéseket okozó, a következőkben felsorolt gombákkal szem- 10 ben: 14 Pseudocercosporella herpotrichoides (CERC) Helminthosporium gramineum (HELM G) Botrytis cinerea (BOT) 15 Pyrenophorae avenae (PYRE) Septoria nodorum (SEPT N) Helminthosporium teres (HELMT). A fentiekben zárójelben megadott rövidítéseket 20 használjuk ezeknek a gombáknak az azonosítására a következő táblázatban. A következő kísérleti módszert követjük mindegyik tesztben: burgonyából, glükózból és agaragarból álló (PDA) táptalajt 120 'C-on autoklávban 25 végzett sterilizálás és túlhűtés után 20-20 ml mennyiségben bemérünk egy sorozat Petri-csészébe. Miközben a csészéket töltjük, egyidejűleg a hatóanyag acetonos oldatát injektáljuk a túlhűtött 30 táptalajba a kívánt végső koncentráció beállítása céljából. Kontrollként az előzőekkel azonos Petri-csészéket veszünk és ezekre hasonló mennyiségű táptalajt töltünk anélkül, hogy hatóanyagot adagolnánk. 35 24 vagy 48 óra elteltével mindegyik csészét beoltjuk ugyanazon gomba korábban készült tenyészetéből származó micélium egy-egy fragmensének elhelyezése útján. Az edényeket 22 'C-on tároljuk 2-10 napon át (a 40 gombafajtától függően) és ezt követően a hatóanyagot tartalmazó edényekben levő gombák növekedését összehasonlítjuk az ugyanazt a gombát tartalmazó kontrolledényben észlelt növekedéssel. Ilyen módon meghatározzuk minden egyes kísér- 45 leti vegyületre azt a legkisebb dózist, amely 80- 100% mértékben biztosítja az adott gombaféle fejlődésének a meggátlását. Ezt a dózist „minimális gátlási koncentráció”-nak nevezzük. A következő táblázatban ezeket a mg/liter egy- 50 ségben kifejezett minimális gátlási koncentrációkat adjuk meg. Kísér leti Minimális gátlási koncentráció (mg/liter) vegyület CERC HELMG HELMT PYRE SEPTN BOT 2(A). 10 30 10 100 30 30 1 3 100 10 10 30 30 Az eddig ismertetett hatástani kísérleti példákban a hatóanyag szuszpenzióinak és emulzióinak koncentrációját g/liter egységekben adtuk meg. Ezek az értékek lényegében megfelelnek a felhasználási arányok számértékeinek, de az utóbbiak 65 g/hektár egységekben fejezhetők ki. A következőkben a találmány szerinti eljárással előállított (I) képletű vegyület és egy további ismert hatóanyag kombinációjának hatását bemutató kísérleti példákat ismertetünk. 8
