202509. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 1,4-diszubsztituált piperazin-és hexahidrodiazepin származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 202509B 1. Kísérleti példa APAF által indukált vérlemezke-aggregáció gátlása Éber New-Zealand hím fehér nyulak szívéből vért gyűjtünk (a nyulak 2-3 kg tömegűek) citromsavat antikoaguláló szerként alkalmazva (egy térfogatrész 3,15%-os citromsav 9 térfogatrész teljes vérre számítva). A vért 600 fordulat/perc sebességgel 10 percig centrifugáljuk, így a vérlemezkében dús plazmát (PRP) kapjuk. A PRP összegyűjtése után visszamaradó vért 3000 fordulat/perc sebességgel 10 percig centrifugáljuk, így a vérlemezkék számát beállítjuk 500000 pl mennyiségre. A vérlemezke aggregációt turbidimetriásan vizsgáljuk [Bőm, Nature, 194. 927-929 (1962)] 8 csatornás aggregométerben [NBS HEMA TRACER 6 Nikoh, Bioscience, Japán]. Pontosabban a PRP-t (250 pl) melegen (37 °C) tartjuk 3 percig szilikon küvettában, amelyhez hozzáadjuk a fiziológiai sóoldatban vagy 10 mM dimetü-szulfoxidban oldott vizsgálati mintát (25 pl), majd fiziológiai sóoldattal hígítjuk. 2 perc elteltével fiziológiai sóoldatban oldott PAF-t (25 pl. 3.10'9—1.10*8 mól) adagolunk és meghatározzuk a maximális aggregáció sebességet. Kontrollként vizsgálati anyag nélküli fiziológiai sóoldatot teszünk a küvettába és meghatározzuk ennek is a gátlási sebességét. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja. 1. táblázat 51 A hatóanyag előállítási példájának a száma Avérlemezke-aggregációt gátló hatás (%) Ahatóanyag-koncentráció: 3xl0’5 mól 1 100 5 100 7 95 8 84 9 87 10 87 12 100 15 100 17 97 52 21 93 23 100 24 100 26 91 28 87 32 100 36 86 38 85 39 100 41 97 43 89 49 100 56 100 58 100 60 100 62 100 65 100 66 100 72 100 84 100 85 100 2. Vizsgálati példa A PAF által indukált hipotenzió gátlása A vizsgálatban 6-8-hetes SD (Jel) hím patkányokat használunk. Egy éjszakán át történő éheztetés után a patkányoknak a femorális artériáját és vénáját pentobarbitallal való altatás közben kanülezzük. Az artériás kanüllel összekötünk egy átalakítót (MPU-0,5-290-0-m, TOYO BALDWIN, Japán) és folyamatosan mérjük a vérnyomást. Amikor a vérnyomás állandósul, a vénához kötött kanülön keresztül fiziológiai sóoldatban oldott PAF-t (0,5-1,0 pg/kg, 250 pg/kg) injektálunk addig, míg a vérnyomás 30-45 Hgmm-re csökken. 30 perc elteltével ismét PAF-t injektálunk és az átlagos vérnyomáscsökkenést (kétszer) használjuk kontrollként. A vérnyomásnak a visszaállítása után vizsgálati mintákat készítünk úgy, hogy a hatóanyagot feloldjuk vagy szuszpendáljuk gumiarábikum fiziológiai sóoldatban készített szuszpenziójában (5%-os) és a mintákat orálisan adagoljuk (5 ml/kg), majd l,2és4 óra elteltével PAF-t injektálunk. A vémyomáscsökkenés gátló hatását a vizsgálati minták adagolását követően a kontrolihoz képest határozzuk meg. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 27
