202492. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piperidin opioid antagonisták és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202 492 B 2 Minden egyes potenciális opioid antagonista hatású anyagot különféle dózisokban adagoltunk morfin fájdalomcsillapító hatású mennyiségének beadagolásával együtt. A morfin a mű opioid receptor antagonista hatású anyagok tipikus képviselője. Ezen túlmenően fájdalomcsillapító hatáshoz elegendő mennyiségű U- 50,488 anyagot adagoltunk, amely a kappa opioid receptor hatású anyagok jellemző képviselője. Az egyes dózisok 1,25 és 2,5 mg/kg voltak. Ezek a dózisok 90- 100 % rángási gátlást mutattak. Minden egyes potenciális antagonista hatású anyagot 1,25 mg/kg dózisban vizsgáltunk morfinnal és U-50,488 anyaggal együttesen adagolva. Amennyiben jelentős antagonista hatást lehetett tapasztalni a fájdalomcsillapítással szemben akár morfin, akár U-50,488 esetében, további elegendő eltérő dózisokat is alkalmaztunk, és meghatároztuk a teljes dózisválasz görbét, valamint ebből az antagonista 50 dózist (ADso). Az AD50 értéket lienáris regresszióval számoltuk a görbéből és ez a vizsgált anyag azon mennyisége, amely az agonista anyag fájdalomcsillapító hatását 50 %-ban csökkenti. A vizsgált vegyületeket valamint a reprezentáns fájdalomcsillapító anyagokat az ecetsav injektálása előtt 20 perccel injektáltuk az állatokba. Az egér rángási tesztvizsgálat eredményeit a II. táblázatban foglaljuk össze. A táblázatban az 1. oszlopban a vizsgált vegyület példaszáma, a 2. oszlopban a vizsgált vegyület azon mg/kg dózisa található, amely ahhoz szükséges, hogy a mű receptor agonista fájdalomcsülapító hatását 50 %-ban csökkentse. A 3. oszlopban a vizsgált vegyület azon mg/kg mennyisége található, amely ahhoz szükséges, hogy a kappa receptor agonista fájdalomcsillapító hatását 50 %-ban csökkentse. II. táblázat Vegyület példaszám Mű AD50 (mg/kg) Kappa AD50 (mg/kg) 1 0,26 0,22 2 0,21 0,29 3 0,08 0,095 4 0,35 0,23 5 0,13 0,22 6 0,11 0,12 7 0,21 0,64 8 0,12 0,13 9 0,19 0,35 10 0,56 0,42 11 0,10 0,12 12 0,37 0,60 13 0,11 0,09 14 0,87 0,62 15 0,21 0,19 16 0,04 0,08 18 0,14 0,35 20 0,05 0,11 21 0,01 0,07 22 0,05 0,24 23 0,03 0,36 Vegyület példaszám Mű AD50 (mg/kg) Kappa ADso (mg/kg) 24 0,07 0,52 25 0,07 0,14 26 0,08 0,22 27 0,35 0,89 28 0,11 0,47 29 1,42 0,44 30 0,17 3,50 31 0,12 0,26 33 0,22 0,30 34 0,05 0,11 35 0,24 0,65 36 0,25 0,25 38 0,065 0,14 39 0,12 0,24 A vegyület 0,05 0,92 B vegyület 0,74 2,50 C vegyület 0,14 4,5 D vegyület 0,16 1,38 E vegyület 0,08 1,12 F vegyület 0,05 0,06 A szakirodalomban kimutatták, hogy a jelentős vizelethajtó hatás abból ered, hogy az opioid antagonista hatású anyagok kölcsönhatásba lépnek az emlősök kappa-opioid receptorával. Lásd például Leander, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, Vol. 224, No.l,89-94 (1983) közleményét. Ennélfogva a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket megvizsgáltuk patkányok esetében vizelethajtó tesztvizsgálatban, amelyet Leander és munkatársai Drug Development Research 4:421-427 (1984) közleményében leírt eljárás szerint végeztünk és ezzel kimutattuk a vegyületek kappa receptor blokkoló aktivitását. Az eljárás szerint 60 hím Long-Evans búbos patkányt (Charles River Breeding Laboratories, Portage, MI) páronként vagy egyenként hőmérséklet-szabályozott ketrecben (23 °C) tartottuk, amelyet reggel 6,0 és este 6,0 között megvüágítottunk. A vizsgálat során mindig rendelkezésünkre állt rágcsálótáplálék és ivóvíz, kivéve a vizeletkimenet vizsgálatának idején. Az állatokat ismételten felhasználtuk, de ez az alkalmazás nem volt gyakoribb, mint kéthetenkénti kísérlet. A találmány szerinti vegyületek antagonista aktivitásának meghatározásához minden egyes állatnak 0,08 mg/kg bremazocint injektáltunk, amely potenciális kappa receptor agonista anyag és vizeletkiválasztást indukál. Ezután az állatoknak különböző dózisú vizsgált vegyületet injektáltunk. A vizeletkiválasztás mérése során az állatokat kivettük a tenyészketrecből, megmértük, beinjektáltuk az anyagot és az állatot metabolizmus ketrecbe helyeztük 5 óra időtartamra. A kiválasztott vizeletet mérőskálával ellátott hengerben gyűjtöttük. A kumulatív vizelet mennyiségét határoz-5 10 16 20 25 30 35 40 45 50 55 60 12
