202322. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiai minták 3'-azido-3'-dezoxi-timidin tartalmának radioimmunológiai meghatározására
5 HU 202 322 B 6 mennyi reagens (tracer, antitest, standardok és minták) oldásához és a térfogatkiegészítéshez 0,05 mólos, 7,4 pH-jú, 0,1% zselatint tartalmazó vizes foszfát puffert (RIA-puffert) használunk. A reagensek összemérése után a kémcsövek tartalmát kémcsőkeverővei néhány másodpercig kevertetjük, majd lezáijuk, és hűtőszekrényben 0-4 *C közötti hőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk. Ezután a TC csövekhez hozzáadunk 500 mikroliter hideg RIA-puffert, a többi csőhöz pedig 500 mikroliter csontszén szuszpenziót, amelyet a hozzáadás közben jeges-vizes fürdőn mágneses keverővei erősen kevertetünk. A szén szuszpenzió összetétele: 0,01 mólos foszfát puffer (pH 7,4) 0,5% Dextran T-70 (Pharmacia, Finnország) és 1% Norit-A (Serva, NSZK). A kémcsöveket 10 percig 0 ‘C-on tartjuk, majd 10 percig 2000xg gyorsulással 0 *C-on centrifugáljuk. Ezután a felülúszókból alkalmas mérőcsövekbe 0,5 mlt pipcttázunk, és ezek radioaktivitását NaI(Tl) szcintillációs kristállyal ellátott automatikus mintaváltó, pl. Minigamma (LKB, Svédország) berendezésen megmérjük. A számítást a radioimmun meghatározásoknál szokásos módon végezzük. 2. példa Vérplazma AZT koncentrációjának meghatározása nyúl vénás véréből Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy radioligandumként nem (la), hanem (Ib) képlctű vegyületet alkalmazunk, a standard AZT hígítási sorozat koncentrációit 0,137-0,41-1,23-3,7- 11,1-33,3-100 ng/ml-re készítjük, és a mintákat hígítallanul, vagy tízszeres hígításban mérjük. A specifikus antitest az 1. példa szerinti. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás biológiai minta 3’-azido-3’-dezoxi-timidin (továbbiakban AZT) tartalmának antigén-antitest reakciós meghatározására ismert mennyiségű, hígítási sorozat szerint különböző koncentrációjú AZT és a meghatározandó biológiai közegminták jelenlétében, melynek során megmérjük nagy fajlagos aktivitású nyomjelzett vegyületnek (továbbiakban tracer, vagy radioligandum) specifikus antitesttel való kötődését, és az ismert mennyiségű AZT hígítási sorozat által okozott kötésváltozásból számítjuk a mindenkori közegminta hatóanyagtartalmát, azzal jellemezve, hogy tracerként jód-125 izotóppal jelzett, nagy fajlagos aktivitású, (I) általános képletű AZT-származékokat használunk, amely képletben X jelentése a (II) vagy (III) képlet szerinti csoport. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy háromezer és százezer, előnyösen tízezer és hatvanezer cpm közötti beütésszámú (I) általános képletű tracert alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárással, azzal jellemezve, hogy antitestként nyúlban - előnyösen 5’-0-szukcinil csoporton keresztül szarvasmarha szérum albuminhoz kötött AZT mint immunogén anyag ellen - keletkezett specifikus anti-AZT immunplazmái vagy immunsavót alkalmazunk olyan koncentrációban, amely az inaktív AZT-t nem tartalmazó mintában a tracer tíz és nyolcvan, előnyösen harminc és hatvan százalékát képes megkötni. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy puffer-oldatként - előnyösen zselatint tartalmazó - nátrium-foszfát oldatot használunk, amelynek pH-ja 4-8 közötti, előnyösen 6-8 körüli, koncentrációja 0,01—1 mól/liter, előnyösen 0,05- 0,1 mól/liter. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a reakcióidő 1 és 50, előnyösen 3 és 24 óra közötti, és a reakció hőmérséklet 0 és 40 'C közötti. 5 10 15 20 25 30 35 4
