202289. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7alfa-acil-oxi-6béta-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo [3.3.0]-oktán-3-on-származékok racemát-hasítására sztereospecifikus enzimes acilát-hidrolízissel
1 A találmány tárgya eljárás racém 7oC-acil-oxi- járás nem vált be. A találmányunk szerinti -6ö-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3- eljárással az ismertnél jobb racemát elválasz-on-származékoknak enzimek segítségével a tást hajthatunk végre, mivel itt nem rontják HU 202289 B 2 megfelelő optikailag aktív alkoholokká történő sztereospecifikus acilét-hidrolizisére. Az eljárás különösen alkalmas a (-)-I általános képletű - amely képletben R jelentése (a) általános képletű csoport, amelyben Rx hidrogénatomot vagy fenil csoportot jelenthet -optikailag aktiv (-)-oxabiciklo[ 3.3.0] oktanolon-származékok előállítására. Az eljárást az jellemzi, hogy (±)—II általános képletű racém oxabiciklo[ 3.3.0] oktanolon-acilát-származékokat - amelyek képletében Rí jelentése az (I) általános képletnél előbb megadottakkal azonos - szubtilizinnel, lipázzal, proteázzal enzimesen sztereospecifikus acilát-hidrolizisnek vetjük alá, és a (-)-I általános képletű vegyületet - amelynek képletében R jelentése (a) általános képletű csoport - elválasztjuk az elhidrolizált (+)-I általá -nos képletű vegyülettől - amelynek képletében R jelentése hidrogénatom. A (-)-I általános képletű vegyületek értékes köztitermékek farmakológiailag hatásos prosztaglandin- és prosztaciklin-analógok szintézisénél. (Erre vonatkozó áttekintések például: J. Bindra, R. Bindra, Prostaglandin Synthesis, Academic Press, New York, 1977, és Szántay Cs., Novák L., Prosztaglandionok szintézise, Akadémiai Kiadó, Budapest, 1978). A természetes anyagokkal analóg szerkezetek szintéziséhez szükségesek ezen enantiomer-sor észterek Jóllehet ismeretesek aszimmetriáé szintézisek, ezek gyakorlati célokra nem alkalmasak, és az ipari előállítás során az optikai aktivitásnak a (+)-3 közbülső fokozatnál végzett racemát-elválasztás útján való bevitelét részesítik előnyben. [Corey, E.J. és munkatársai: JACS 95, 6832, (1973)]. Ehhez a következő eljárási műveletek szükségesek, amelyeket a fenti közleményben ismertetnek és az [A] reakcióvázlat szemlélteti: 1. A lakton hidrolízise hidroxi-sawá. 2. Diasztereomer sók keverékévé való átalakítás, például d-(oC-fenil-etil)-aminnal. 3. A diasztereomer tiszta só kinyerése céljából végzett kristályosítás. 4. A só átalakítása a (-)-3 képletű optikailag aktív laktonná. 5. További átalakítás (-)-I általános képletű optikailag aktív kiindulási vegyületté. A hidroxi-karbonsav azon hajlama miatt, hogy ismét visszaalakul a laktonná, mielőtt az optikai tisztítás megtörténne, valamint a kristályosításnál fellépő kitermelési veszteségek miatt az [A] reakcióvázlaton ábrázolt ela kitermelést az ismert eljárás során relakto- 5 rizáció miatt fellépő veszteségek. A jelen találmány szerinti eljárás során az elválasztást a (±)-II általános képletű racém 7oC-acil-oxi-6ß- (hidroxi-metil )-2-oxa- biciklo[3.3.0]oktán-3-on enzimes hidrolízisével 10 hajtjuk végre, amely olyan termékelegyet eredményez, melyből a kívánt (-)-I általános képletű vegyületek vagy extrakcióval a szerves fázisból, vagy a vizes fázisból kinyerhetők. 15 A kiindulási vegyületek az 1 579 464 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás szerint állíthatók elő. A jelen találmány szerinti eljárással előállítható (-)-I általános képletű optikailag 20 aktív észterek köztitermékként farmakológiailag értékes prosztaglandin- és prosztaciklin-analógok előállítására való felhasználása a már említett irodalmi áttekintésekből következik. 25 A találmány szerinti eljáráshoz előnyösen a következő enzimek felelnek meg: Bacillus subtilisból származó szubtilizin (Boehringer Mannheim cég), .Sclerotinia' lipáz (Nagase cég), 30 alkaliku8 proteáz (Nagasa cég), Bacillus subtilisból származó proteáz. Alcalase T néven forgalmazott proteáz. (NOVO cég). Az enzimek mind oldott, mind szuszpen- 35 dált vagy immobilizált (például bróm-ciánnal aktivált Sepharózra vagy oxirán-akril-gyöngyókre kötve, vagy bármilyen más módon immobilizálva) formában használhatók. A jelen találmány szerinti eljárással eló- 40 állítható optikailag aktív (-)-I általános képletű oxabiciklo-oktanolon- származékok értékes kóztitermékek farmakológiailag hatásos prosztaglandinok és prosztaciklinek szintéziséhez. Kiderült, hogy a sztereospecifikusan 45 hidrolizáló enzimek nagyobb része a (±)-II általános képletű racém vegyületeket (-0-1 általános képletű optikailag aktív diollá, amelynek képletében R jelentése hidrogénatom, 50 hidrolizálja, míg a beadagolt (±)—II általános képletű racemátnak az abszolút konfigurációjában természetes prosztaciklin PGIx-nek megfelelő komponense elhidrolizálatlan, azaz (-)-I általános képletű vegyület - amelynek 55 képletében R jelentése (a) általános képletű csoport -marad, és a dióitól való elválasztás után természetes konfigurációjú prosztaciklin-analógok szintéziséhez felhasználható. 60 A találmány szerinti eljárás kivitelezése különben önmagukban ismert olyan körülmények között történik, amelyek enzimes reakciók kivitelezésére használatosak. Az enzimes átalakítás lefutását folyamatosan kivett min- 65 ták analízisével követjük. Analízismódszer-3
